[发明专利]一种鼠尾藻多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及海藻类多糖的提取技术领域，尤其涉及一种鼠尾藻多糖的提取方法。

背景技术

鼠尾藻隶属圆子纲、墨角藻目、马尾藻科、马尾藻属，生长在中潮带岩石上或石沼中，广泛分布于我国沿海地区，并可进行大面积养殖，原料丰富，被收载于《中国海洋药物辞典》。因其具有软坚散结、利尿消肿、清热化痰之功效；同时具有较全面的营养价值，已被应用于医药、保健、水产养殖及化学工业等行业中，有许多可开发的潜力。

鼠尾藻富含鼠尾藻多糖，鼠尾藻多糖能促进人粒细胞超氧阴离子自由基的释放，提高超氧化物歧化酶活性。目前关于鼠尾藻多糖提取方法的研究不多，主要采用的是热水浸提法，该方法存在耗时、耗能、得率低等缺点。

发明内容

因此，针对以上内容，本发明提供一种鼠尾藻多糖的提取方法，解决现有技术中的提取方法耗时、耗能、得率低的问题。

为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：一种鼠尾藻多糖的提取方法，包括以下处理步骤，

a、恒温水浴处理：将鼠尾藻和稀酸溶液以重量比为1：120，在恒温水浴锅97℃水浴200～220min，去除固体杂质，得到提取液，提取液用4mol/L的NaOH中和至pH=7.0；

b、提取液预处理：将提取液进行浓缩、冷却至室温，加4倍体积无水乙醇醇沉，置4℃冰箱过夜，离心弃上清，加蒸馏水溶解沉淀，对得到的溶液反复冻融，离心除杂，冷冻条件为-20℃，溶解条件为50℃，重复7次，然后采用冷冻干燥机干燥，得到粗品1；

c、粗品1脱蛋白：粗品1按重量比1:25溶于蒸馏水，得到糖液，然后加入糖液总体积1/4体积的sevage试剂，充分震荡3h，离心取上层糖液，重复12次；对糖液冻融，离心除去杂质，冷冻条件为-20℃，溶解条件为50℃，重复5次，然后采用冷冻干燥机干燥，得到粗品2；

d、对得到的粗品2进行分离纯化。

进一步的，步骤a的稀酸溶液为盐酸。

进一步的，步骤b总采用旋转蒸发仪进行浓缩，所述旋转蒸发仪的温度控制在70～75℃。

进一步的，步骤c所述的sevage试剂为氯仿与正丁醇按重量比4:1混合而成。

进一步的，步骤d的分离纯化方法具体为：（1）凝胶的预处理：将凝胶置于真空干燥器中，连接循环水式真空泵，进行间歇抽真空，抽气30～35分钟，休息5-10分钟，并用玻璃棒搅拌，使其松散，使凝胶里的气体可以全部抽出；（2）装柱与平衡：将层析柱夹持在铁架台上，保持垂直，从柱顶端倒入平衡缓冲液，待气泡排除后，使蒸馏水在柱内保持3～5cm高度，关闭柱出口，用玻璃棒轻轻搅匀凝胶悬浮液，待凝胶沉淀，打开恒流泵，调节流速在60～65mL/h，用2000～2100mL的蒸馏水平衡，使之紧密结实；（3）上样检测与收集：取500mg粗品2溶于10mL蒸馏水，将柱上层缓冲液吸出与凝胶表层持平后，吸取样品溶液沿层析柱内壁同一方向旋转缓慢加入，使样品在胶柱表面分布均匀；加完后，打开恒流泵，使样液进入柱体，待柱体上表面剩余1～2mm样液时，沿层析柱内壁同一方向，旋转缓慢加入蒸馏水，将壁上的粘着液洗下，然后继续按此方法加入蒸馏水至距胶柱上表面约8cm高度；封盖柱体，调节流速60～65ml/h，先后分别用蒸馏水洗脱、1mol/LNaCl线性梯度洗脱；设定12min收集一管，每管12ml，自动部分收集器收集100管；用苯酚-硫酸法测定糖含量分布情况，用紫外分光光度法测定蛋白质含量分布情况，记录数据并制作洗脱分布图，根据波峰范围部分收集洗脱液；用截留分子量3500的透析袋对收集液自来水流水透析24h,然后蒸馏水透析24h,透析完成后进行旋转蒸发浓缩，冷冻干燥机冻干，即得到鼠尾藻多糖。

通过采用前述技术方案，本发明的有益效果是：本发明的鼠尾藻多糖的提取方法，包括将鼠尾藻与稀酸混溶恒温水浴，得到提取液，对提取液进行预处理得到粗品1，再对粗品1进行脱蛋白得到粗品2，然后分离纯化，上述方法提取鼠尾藻多糖不耗时，节能，且多糖的得率高，提取的多糖具有较强的抗氧化活性和癌细胞生长抑制作用。

具体实施方式

以下将结合具体实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。

若未特别指明，实施例中所采用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所采用的试剂和产品也均为可商业获得的。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明。

本发明的实施例为：