[发明专利]重组人血白蛋白的液体制剂

说明书

技术领域

本发明公开了一种重组人血白蛋白的液体制剂，属于生物制剂技术领域。

背景技术

人血白蛋白（HSA）是存在于人循环系统中的最普遍的血液蛋白，由585个氨基酸组成，分子量为66kD。它在人体内承担着相当大的作用，如具有维持血液渗透压和携带血液中多种配基（包括氨基酸，脂肪酸，金属离子，类固醇及药物）与组织进行交换等生理功能。

在临床上，人血白蛋白被用于低蛋白血症、胎儿红细胞增多症、各种原因引起的出血性休克及肝硬化腹水等的治疗。另外人血白蛋白还被用作药物赋形剂、稳定剂以及细胞培养添加剂。在过去的几十年间，由于人血白蛋白的广泛应用，其需求量变得非常巨大，总需求量超过500吨/年。

尽管已经在提取工艺上取得了巨大的进步，但传统血浆来源的人血白蛋白还是远远不能满足现在的市场需求。而且由于血液中存在各种传染性疾病病原体的潜在危险，尤其是艾滋病、乙肝等病毒的传播，来自人源血浆的白蛋白在纯化过程中难免将这些病毒带入终产品。基于上述原因，利用基因重组技术生产的重组人血白蛋白（rHSA）既可避免病原体感染；同时可以解决血液供应有限的难题。

重组蛋白药物产品本身是一个复杂的大分子结构，经过蛋白质复杂的翻译后加工与修饰，形成具有高度特异性的三、四维结构，如重组人血白蛋白就是由585个氨基酸折叠成三螺旋结构域的多肽链，分子中含有35个半胱氨酸和17个二硫键。rHSA与其他任何蛋白质一样，其生物学活性如其结合亲和性或者中和活性依赖至少核心氨基酸序列的构象完整性，同时需要保护蛋白质的多个功能集团保持稳定。

化学和物理不稳定性均可导致蛋白质变性。因为蛋白质药物比传统的有机和无机药物更大且更复杂，因此这种重组蛋白药物的制剂会出现特殊问题。蛋白质的稳定性可以受到多种因素影响，包括离子强度、pH、温度、重复冷冻/解冻循环、蛋白质浓度和剪切力。蛋白质的活性可以由于物理不稳定性和化学不稳定性而丧失，物理不稳定性包括变性、聚集(可溶及不可溶聚集体形成)、沉淀与吸附；化学不稳定性包括外消旋化、β-消除或者二硫键交换、水解、脱酰胺作用和氧化等等。这些不稳定性均可能导致生物学活性的降低、毒性和/或免疫原性的增加，蛋白质副产物或者衍生物的形成。因此，提供一种能稳定保存重组人血白蛋白，并适合于实际临床使用的制剂处方是很有意义的。

虽然现有技术领域指出了可适用于生产特定蛋白质制剂的许多制剂辅料，但是不能预测为了克服特定蛋白质可能具有的特定的不稳定性问题而应该加入哪些辅料以及应该加入的量。因此找寻用于配制rHSA制剂的合适辅料和最佳条件充满了挑战。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的申请人进行了大量的实验，对可以用于rHSA制剂的辅料的类型和用量进行了大量的筛选，公开的rHSA液体制剂能够充分防止重组人血白蛋白的聚集、降解、氧化和变性等，具有使重组人血白蛋白长时间保持稳定，保持其生物学活性，方便于临床使用，从而达到了本发明的目的。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种重组人血白蛋白的液体制剂，所述液体制剂主要成分为：重组人血白蛋白、等渗调节剂、蛋白保护剂和蛋白热稳定剂，pH6.4~7.4。

所述的重组人血白蛋白浓度为100~250g/L。

所述的等渗调节剂为氯化钠，浓度为100~150mmol/L。

所述的蛋白保护剂为吐温80或吐温20，浓度为10~50mg/L。

所述的蛋白热稳定剂为辛酸钠，浓度为0.14~0.18mmol/L。

所述的重组人血白蛋白的液体制剂优选为，由100～250g/L重组人血白蛋白、115mmol/L氯化钠、15mg/L 吐温80、0.16mmol/L辛酸钠组成，pH值为7.0。

本发明公开的制剂可以使重组人血白蛋白在2～8℃条件下至少2年保持稳定。

本发明公开的液体制剂的制备方法，包括以下步骤：

⑴ 配置氯化钠浓度为100~150mmol/L的水溶液；

⑵ 纯化得到的重组人血白蛋白用超滤膜浓缩，用步骤⑴配置的水溶液进行换液；

⑶ 换液完成，重组人血白蛋白溶液中加入吐温80或吐温20中的一种，终浓度为10~50mg/L；加入辛酸钠，终浓度为0.14~0.18mmol/L；

⑷ 重组人血白蛋白溶液以稀酸或稀碱调pH至6.4~7.4。