[发明专利]一种荸荠多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物多糖的提取方法。更具体地说，本发明涉及一种荸荠多糖的提取方法。

背景技术

荸荠(Eleochairistoberosa)，又名马蹄(Water chestnut)，地栗、乌芋、通天草等，属莎草科荸荠属，是多年生浅水草本植物。在中国长江流域以南各省均有栽培。荸荠以其地下球茎为食用器官，是一种药食兼用的果蔬类食品。其肉质细嫩，营养丰富，汁多味甜，清脆爽口，在南方自古有“地下雪梨”之美誉，北方则称其为“江南人参”。

研究发现马蹄内含有的活性成分包括黄酮类、多酚类、多糖类、甾醇类和马蹄英等。荸荠多糖具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、免疫调节等功能与人工合成的抗氧化剂相比，荸荠多糖具有安全性高、来源广等特点，在食品、化妆品和医药等领域显示出广阔的应用前景。目前荸荠多糖提取方法甚多，每种方法都各有利弊，选择合适的荸荠多糖提取方法可满足不同的需要。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种荸荠多糖的提取方法，其采用酶解法与超声波相结合的提取工艺，具有反应条件温和、时间短、试剂消耗少等优点，适于工业化大生产。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种荸荠多糖的提取方法，包括以下步骤：

步骤一，一次提取，称取荸荠粉100g，按料液重量比1：20-40加入蒸馏水，在60-70℃下进行超声波提取，超声时间为20-30min，超声功率为600w；

步骤二，二次提取，将步骤一制得的溶液降至室温，然后加入纤维素酶进行二次提取，其中酶解温度为40-48℃，酶解时间为35-45min，酶用量为150-180U/g；

步骤三，脱脂，将步骤二制得的溶液加入94％乙醇脱脂，沉淀静置过夜后离心取上清液；

步骤四，将步骤三制得的上清液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩液中加入无水乙醇，使乙醇浓度达到80％，摇匀，静止沉淀30min；倾倒去上清得沉淀，沉淀用蒸馏水复溶，得到糖液；将制得的糖液,用体积比为25∶5∶1的糖液:氯仿:正丁醇进行萃取,弃去中间层的变性蛋白及下层的有机液，萃取5次，得到去蛋白糖溶液；将去蛋白糖液浓缩,浓缩液先放冰箱中冷冻,再放置真空冷冻干燥，得到荸荠粗多糖；

步骤五，利用DEAE-52纤维素柱层析和Sephadex G-25凝胶柱层析进行荸荠多糖的纯化制得荸荠多糖。

优选的是，所述步骤一中，超声波提取的所述料液重量比为1：40，超声温度为62℃，超声时间为21min，超声功率为600w。

优选的是，所述步骤二中，酶解温度40℃，酶解时间42min，纤维素酶用量174U/g，pH值为6.0。

优选的是，所述荸荠多糖的提取方法还包括：所述荸荠粉的制备，具体为选取饱满无病斑的荸荠洗干净、去皮、蒸馏水清洗2遍，切片、60℃烘干、粉碎过60目筛。

优选的是，所述步骤三中，离心的转速为5000r/min，时间为15min。

优选的是，所述步骤五中，所述DEAE-52纤维素柱层析具体包括：

a，溶液配制

0.5％HCL溶液：准确量取20.85ml盐酸，用蒸馏水定容至500ml；

0.5％NaOH溶液：准确称取10g NaOH，用蒸馏水溶解定容至500ml，移到塑料瓶中备用；

Tris-HCL溶液：准确称取Tris 2.422g溶于适量的蒸馏水中，用浓盐酸溶液调节pH值至7.4，再用蒸馏水定容至1000mL；

不同NaCL浓度的系列Tris-HCL洗脱液：分别称取0.5852g，1.7556g，2.926g，4.0964g，5.852g NaCL，用Tris-HCL溶液溶解定容到100ml，即得0.1、0.3、0.5以及1.0mol/L NaCl洗脱液；

b，DEAE-纤维素的处理：称量15g DEAE-52阴离子交换剂干粉，用蒸馏水浸泡，去除杂质；再用0.5mol/L的HCL溶液浸泡1h，再用蒸馏水洗至pH值中性，并在抽滤漏斗中将其抽干；再用0.5mol/L的NaOH溶液将抽干的离子交换剂浸泡1h，再用蒸馏水将其洗至中性，抽干，浸泡于pH7.4 20mmol/L Tris-HCL缓冲液中；

c，装柱:将活化后的DEAE-cellulose 52离子交换填料装填柱型为2.8cm×50cm层，柱床高度为25cm；

d，平衡:用Tris-HCl液以2.5mL/min流速平衡柱床1个柱床体积；