[发明专利]结核菌群的免疫学检测方法和试剂盒

说明书

本申请是中国专利申请201380018968.0的分案申请，原申请的申请日为2013年04月04日，发明名称为结核菌群的免疫学检测方法和试剂盒。

技术领域

本发明涉及高度安全的结核菌群(Mycobacterium tuberculosis complex)的免疫学检测方法和试剂盒，其通过在预定的温度下加热处理生物样品并免疫学检测由此被细胞外分泌(extracellularly secreted)的结核菌群特异的分泌蛋白质，可在不进行培养操作的情况下由含有结核菌群的生物样品直接简便且迅速地进行。

背景技术

结核(Tuberculosis)为目前高度重要的传染病，据称每年日本国内有数千人、世界各地有数百万人死于该疾病，根据传染病法(Infectious Disease Law)疑似结核感染的患者必须入院。当诊断患者患有结核时医师必须立即报告给当局，因而需要及时的响应。

属于结核菌群的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，人型结核菌)、牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis，牛型结核菌)、鼠结核分枝杆菌(Mycobacterium microti，鼠型结核菌)和非洲结核分枝杆菌(Mycobacterium africanum，非洲型结核菌)已知为对人类致病的抗酸菌(acid-fast bacteria)。鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium)、堪萨斯结核分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)和海鱼结核分枝杆菌(Mycobacterium marinum)等已知为非结核性分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria)。

感染有结核菌群的人类主要由结核分枝杆菌引起，在某些罕见病例中，由牛结核分枝杆菌引起。近年来，非结核性分枝杆菌种中，感染有鸟结核分枝杆菌的病例增加。由于这两类感染存在类似的临床症状，病因细菌的鉴定对于确定治疗方针也是重要的。

因此，结核感染或非结核性分枝杆菌感染的区别检测对于减轻患者负担和适当地进行早期治疗同样是重要的。在另一方面，从公共卫生的角度，区别检测对于防止第三人继发感染的目的也是重要的。

迄今为止，作为检测结核菌群的方法，已实施了基于培养的检测方法。此类培养方法通过将待试验的生物样品接种至液体培养基或固体培养基并检测生长的细菌细胞来进行。尽管使用液体培养基的方法可缩短待试验的生物样品的培养期，但该方法在操作期间具有继发感染的高风险，因而需要高度安全的设备和装置。使用固体培养基的方法需要长达大约2个月的时间才能获得检测结果。结核菌群必须使用高度安全的装置在高度安全的环境中特别小心地培养以防止继发感染。

作为用于从上述培养的生物样品的培养基中鉴定结核菌群的方法，已知涉及免疫学测定分泌至培养基中的结核菌群特异的蛋白质的简便检测方法。

日本专利特开平11-108931号公报公开了用于检测结核菌群存在的方法，该方法包括：将从结核病患者收集的生物样品接种至固体培养基或液体培养基，培养结核菌群数日至数周；然后免疫学检测分泌至培养基中的结核菌群特异的分泌蛋白质MPB64。根据该文献，该方法与常规方法相比允许在培养后立即鉴定和检测结核菌群并减少操作期间继发感染的风险。

然而，该方法涉及培养包含在生物样品中的结核菌群，并使用得到的培养物作为样品。因此，该方法需要与直至结核菌群被检测和鉴定的培养期几乎相同的时间，因而需要大量劳力和费用。

如日本专利特开平11-108931号公报所述，MPB64为牛结核分枝杆菌BCG(M.bovis BCG)产生并被细胞外分泌的结核菌群特异的分泌蛋白质。MPT64为结核分枝杆菌产生并被细胞外分泌的结核菌群特异的分泌蛋白质。MPB64和MPT64已知为相同的物质。

日本专利特开2002-62299号公报指出，结核菌群特异的分泌蛋白质MPT64可在不培养包含在生物样品中的结核菌群的情况下通过免疫学测定来检测。该方法涉及处理生物样品如痰并检测包含在生物样品中的MPT64，从而检测结核菌群的存在。

然而，即使结核菌群存在于生物样品中，除非MPB64由结核菌群被细胞外分泌并包含在生物样品中，否则该方法也不能检测出结核菌群。另外，丰度小的MPT64，即使分泌也需要大量的生物样品并使操作复杂化。该操作增加了试验对象和负责试验人员的负担。同时，可能会忽略结核菌群的感染，导致公共卫生问题。