[发明专利]一种用VCAM-1检测MSC促内皮细胞增殖能力的方法

说明书

本发明公开了一种用VCAM‑1检测MSC促内皮细胞增殖能力的方法，其特征在于发现了一种已知蛋白VCAM‑1的新用途，通过EL I SA检测VCAM‑1的蛋白表达，用Bradford法测定总蛋白含量，利用每1g总蛋白中VCAM‑1的蛋白含量来反映细胞的促内皮细胞增殖能力，以此方法可以对MSC的促内皮细胞增殖能力进行定量。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体而言，涉及用VCAM-1(血管细胞粘附分子-1)检测MSC(间充质干细胞)促内皮细胞增殖能力的方法。

背景技术

血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)，也称为CD106，是一种属于免疫球蛋白超家族的细胞表面唾液酸糖蛋白。VCAM-1有两个亚型，具有六个或七个由选择性剪接产生两种形式的VCAM-1的胞外Ig样结构域，主要的存在形式是具有七个胞外Ig样结构域的亚型。VCAM-1是一种内皮细胞配体，与白细胞上表达的VLA-4抗原和α4β7整合素结合，从而介导白细胞-内皮细胞粘附和信号转导。炎症性肠病，动脉粥样硬化，同种异体移植物排斥，感染和哮喘反映中内皮细胞上VCAM-1被诱导表达。在这些反映中，VCAM-1为白细胞迁移构成一个支架。VCAM-1也可以激活内皮细胞内的信号导致的“内皮细胞门”的开启，通过它白细胞得以迁移。VCAM-1已经被认为是一种潜在的抗炎治疗靶点，减少VCAM-1的表达将减缓动脉粥样硬化的发展。此外，在血管内皮细胞的VCAM-1激活的信号由细胞因子调控，这表明它在炎症过程中对于内皮细胞粘附分子的表达和功能是很重要的。

VCAM-1在大多数静止内皮细胞低表达，在血管损伤、应激等情况下可被IL-1、TNF-α、IL-4等细胞因子诱导，主要表达于新生血管区。其体内的可溶形式通过介导内皮细胞趋化而显示血管生成活性。

血管是人体的重要组成部分，血管生成(angiogenesis)是从已有血管发芽生成新血管的过程，整个血管的内表面都是由一层内皮细胞所覆盖的，血管的生成与血管内皮细胞迁移和增殖相关。

体内外实验证明MSC具有治疗性血管生成作用，它可以通过直接分化成内皮细胞或者血管平滑肌细胞参与血管新生，另外它还能够分泌多种促血管形成因子，改善微环境，促进血管内皮细胞增殖和迁移，进而促进血管新生。

MSC的促血管新生的特性对肢体缺血的治疗有着非常重要的临床意义。但是目前缺乏检测和评价MSC的促血管新生能力的方法，阻碍了细胞的临床应用。

本发明的发明人通过研究发现，MSC的促血管新生能力中，VCAM-1表现出高度的相关性，基于这一发现发明了本发明。

本发明的目的在于提供一种全新的、能够有效检测MSC促血管新生能力的方法。

发明内容

本发明的第一技术方案为，一种用VCAM-1检测MSC促内皮细胞增殖能力的方法，其特征在于，检测MSC中VCAM-1的蛋白含量，测定总蛋白含量，根据总蛋白中的VCAM-1的蛋白含量百分比来检测MSC的促内皮细胞增殖能力。

第二技术方案为，基于第一技术方案，其特征在于，所述MSC为包含VCAM-1阳性的MSC。

第三技术方案为，基于第二技术方案，其特征在于，

步骤1，将MSC和内皮细胞共培养后，检测内皮细胞的增殖数，得到MSC促进内皮细胞增殖率，

步骤2，测定MSC的总蛋白含量，

步骤3，检测MSC的VCAM-1的蛋白含量，

步骤4，计算总蛋白中的VCAM-1的蛋白含量百分比，

步骤5，应用统计学方法分析VCAM-1的蛋白含量百分比与步骤1中的MSC促进内皮细胞增殖率之间的相关性，对VCAM-1的蛋白含量百分比与促内皮细胞增殖能力之间的关系进行定量。