[发明专利]IL-12/CD107a融合蛋白增强CTL抗肿瘤效果的治疗剂及其制法和用途

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括融合在一起的以下元件：

(i)任选的位于N端的信号肽和/或前导肽；

(ii)第一蛋白元件；

(iii)第二蛋白元件；以及

(iv)任选的位于第一蛋白元件和第二蛋白元件之间的连接肽元件；

其中，所述信号肽可操作地连于由(ii)、(iii)和(iv)所构成的融合元件；

并且第一蛋白元件为IL-12蛋白元件；第二蛋白元件为CD107a蛋白元件；

在另一优选例中，所述的CD107a是去掉CD107a分泌肽的CD107a成熟的蛋白元件；

在另一优选例中，所述的“可操作地连于”指所述信号肽可引导所述融合元件的表达或跨膜转移(定位)；

在另一优选例中，所述的融合蛋白具有选自下组的结构：

(1)式Ia所述结构：

D-A-B(Ia)，或

(2)式Ⅱa所述结构：

D-A-C-B(Ⅱa)，

其中，

A为IL-12蛋白元件；

B为CD107a或CD107a成熟蛋白元件；

C为任选的连接肽元件；

D为任选的信号肽信号肽和/或前导肽序列；

“-”表示连接上述元件的肽键或肽接头；

在另一优选例中，所述的连接肽元件包括序列如SEQIDNO.:12所示的连接肽；

在另一优选例中，所述的IL-12蛋白来源于人或非人哺乳动物；

在另一优选例中，所述的IL-12蛋白包括野生型和突变型；

在另一优选例中，所述的IL-12蛋白包括全长的、成熟形式的IL-12，或其活性片段；

在另一优选例中，所述的第一蛋白元件包括IL-12蛋白的一个或两个亚基；

在另一优选例中，所述的IL-12蛋白的亚基选自下组：P40和P35亚基；

在另一优选例中，所述的第一蛋白元件包括连接在一起的IL-12蛋白P40和P35亚基；

在另一优选例中，所述的P40和P35亚基为“头-头”、“头-尾”、“尾-尾”相连；

在另一优选例中，所述的P40和P35亚基之间存在或不存在接头(linker)；

较佳地，所述的接头为柔性的4-20个氨基酸的接头，更佳地，所述的接头为GGGGGGS(G₆S)(SEQID NO.:14)；

在另一优选例中，所述的IL12蛋白元件的序列如SEQIDNO.:6所示；

在另一优选例中，所述的成熟CD107a蛋白元件中缺少了分泌肽；

在另一优选例中，所述的CD107a蛋白来源于人或非人哺乳动物；

在另一优选例中，所述的CD107a蛋白包括全长的、成熟形式的CD107a，或其活性片段；

在另一优选例中，所述的CD107a蛋白元件的序列如SEQIDNO.:8所示；

在另一优选例中，所述的肽接头的长度为0-15个氨基酸，较佳地1-10个氨基酸；

在另一优选例中，所述融合蛋白还包括信号肽元件D；

在另一优选例中，所述的融合蛋白中，在单链IL-12(第一蛋白元件)和CD107a(第二蛋白元件)之间设 有连接肽，优选SGSG序列(SEQIDNO.:12)；

在另一优选例中，所述的融合蛋白中，第一蛋白元件为单链IL-12，在所述单链IL-12中，在P40亚基 及P35亚基设有连接肽G₆S(SEQIDNO.:14)；

在另一优选例中，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.:2所示；

在另一优选例中，所述融合蛋白具有以下多种特征：

a)所述融合蛋白CD107a去掉了分泌肽；

b)所述融合蛋白包含IL-12的两条亚基,即P40和P35亚基,并由GGGGGGS(G6S)连接；

在另一优选例中，所述的融合蛋白为单体、或二聚体。