[发明专利]水飞蓟素脂质纳米粒的制备及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及靶向递药系统，具体涉及一种用于治疗自闭症的脑 靶向递药系统，尤其是一种水飞蓟素脂质纳米粒的制备方法和应用。

背景技术

自闭症是神经系统发育失调导致的一种大脑广泛性发育障碍。自闭症影响人社会交往技 能的发展和人际沟通能力，,常在3岁前发病。其病因多样，但具体发病机制尚不清楚。目前 认为，该病可能是环境因素与遗传易感性共同作用的结果。研究发现，自闭症的发生与氧化 应激及炎症反应有一定相关性，自闭症患者脑内存在炎症反应异常的现象，表现为致炎细胞 因子增多，这些致炎因子与自闭症患者缺乏社交能力，抵抗新事物以及睡眠紊乱等症状有关。 脑内炎症反应和氧化应激增加可能会导致炎症，激活小胶质细胞。因此，可能是炎症反应致 使小胶质细胞活化从而促进脑部病变和临床症状。

由此，利用抗炎药物治疗自闭症受到人们的关注，而中药抗炎药，因其药效好、不良反 应少以及来源丰富等优势，越来越受到人们的重视，研究和开发新的具有抗炎活性成分的中 药也逐渐成为热点。水飞蓟素是传统的中药，近来研究发现，其有很好的抗炎效果。

由于小分子药物透过血脑屏障的能力有限，许多研究认为血脑屏障是脑部疾病治疗的瓶 颈。因此通过设计新型的脑靶向载药系统，克服血脑屏障的阻碍，提高传统药物的疗效、增 加治疗窗。

纳米粒是目前研究较多的一类用于脑部靶向治疗的递药载体系统，包括如下优点：具有 特异性，靶向性，定量准确、易吸收，具有适当的粒径与粒型，颗粒小；可减少药物降解， 提高药物稳定性；具有较高的载药量，具有在靶部位定位的能力，减少给药剂量，进一步减 少或避免药物的毒副作用；具有较长的体内循环时间，增加脑靶向效率。

基于以上背景，我们主要研究基于炎症反应的自闭症发病机制，并利用自闭症动物模型 给予中药抗炎药治疗，检测药物对自闭症动物炎症反应的干预作用。具体方法是以BTBR T+tf/J鼠为自闭症动物模型，并分别用水飞蓟素及其纳米粒对BTBRT+tf/J鼠炎症反应进行药 理干预，主要评价药物对该自闭症模型小鼠脑部海马区和皮层的神经生物化学分子标志物变 化。

发明内容

本发明的一个目的是提供水飞蓟素脂质纳米粒，通过以下制备步骤实现：

取硬脂酸270mg、中链甘油三酯(MCT)90mg、水飞蓟素40mg，加入2mL无水乙醇 中，水浴60℃下加热搅拌使其溶解，趁热将上述溶液缓慢注入18mL含有0.1％(质量百分 数)吐温80的纯净水中，60℃磁力搅拌5min，室温搅拌冷却至室温，呈乳黄色，既得2mg/mL 水飞蓟素脂质纳米粒溶液。

其中脂质纳米粒的材料不限于单硬脂酸甘油酯、中链甘油三酯等，可以是其他常用的脂 肪酸甘油酯。

本发明的另一个目的是提供所述水飞蓟素脂质纳米粒在制备自闭症炎症干预药物中的应 用。所述脂质纳米粒作为给药载体在制备自闭症药物中的应用。

本发明所述的应用通过以下步骤实现：

利用BTBRT+tf/J鼠为自闭症动物模型。实验分组：正常对照组、自闭症模型组、水飞蓟 素给药组(100mg/kg)、水飞蓟素纳米粒组(20mg/kg)、地塞米松组(0.125mg/kg，阳性药 组)。各组小鼠每天灌胃给药，连续给药30天。小鼠给药30天后进行对炎症干预作用的评价。

评价指标：

(1)脑内炎症病灶区药物累积成像：将加入荧光材料的脂质纳米粒对小鼠灌胃给药，分 别在给药2h、4h、6h、8h后观察各给药小鼠的脑部荧光分布情况。荧光脂质纳米粒在小鼠 脑部的时效累积荧光强度成像，如图1。

结果表明，脂质纳米粒具有很好的脑靶向性，能有效的穿通血脑屏障，且2h时累积荧光 强度最大，随后慢慢减弱，到8h时几乎没有看到荧光，说明给药2h时进入脑内的纳米粒最 多，随后随着体内纳米粒的代谢和消除，其含量逐渐减低，到8h后几乎消失。

(2)免疫印迹检测：连续给药30天后，取各组小鼠的脑部海马和皮层区，用免疫印迹 法考察皮层和海马中炎症相关蛋白Caspase-1、CathepsinB、IL-1β和NLRP3的表达变化，表 征炎症干预程度，免疫印迹及定量见图2-图9。