[发明专利]mir-1292及其靶基因在预防和治疗骨肉瘤转移中的应用

说明书

本发明涉及mir‑1292及其靶基因在预防和治疗骨肉瘤转移中的应用，更具体的涉及mir‑1292和/或miR‑1292‑5p及其靶基因DST在诊治骨肉瘤中的新用途。发明对转移性骨肉瘤患者及正常对照进行高通量测序分析，获得其miRNA和mRNA的表达数据，选取后备miR‑1292‑5p及其靶基因DST进行分子生物学验证及靶标验证，结果显示，本发明提供的miR‑1292‑5p及其靶基因DST与骨肉瘤转移密切相关，可用于临床诊断及预防检测，具有很好的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及mir-1292及其靶基因在预防和治疗骨肉瘤转移中的应用，更具体的涉及mir-1292和/或miR-1292-5p及其靶基因DST在诊治骨肉瘤中的新用途。

背景技术

骨肉瘤是常见的原发性恶性肿瘤之一，约占全部骨科肿瘤的15％左右，多发生在青少年，社会危害极大。化疗方案和手术方式改进使得生存率得到逐步提高，但是近十年来骨肉瘤的生存率没有得到进一步地改善，这其中早期转移是一个重要限制因素。骨肉瘤发病特点是绝大多数骨肉瘤在诊断时己经成为高等级的恶性肿瘤，超过15％的患者出现临床肺转移病灶，由于现在的检测手段限制，80％的患者微小转移病灶无法查出。骨肉瘤的原发病灶患者生存率在65％左右，一旦出现转移，骨肉瘤的生存率只有25％，甚至更低。研究揭示骨肉瘤转移机制是临床中迫切需要解决的重大问题。

miRNA通常由RNA聚合酶II(Pol II)转录生成。Pol II结合在以后形成发夹结构的颈环DNA序列附近。生成的转录本经修饰添加5’帽子结构和3’末端多腺苷酸尾巴结构，并剪切，生成的产物称为初级miRNA(pri-miRNA)，该产物可能长达数千或数百核苷酸，随后进一步生成前miRNA(pre-miRNA)，在胞浆中，pre-miRNA发夹结构经RNase III Dicer切割处理。这种内源性核糖核酸酶(endoribonuclease)与发夹结构的3’相互作用并在环的3’和5’臂上完成切割，产生长约22nt并不完美匹配的miRNA：miRNA*双链结构。

miRNA与靶mRNA的典型作用方式主要有两种。在大多数情况下，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3’UTR不完全互补配对，阻断靶基因的翻译，从而调节基因表达。这种方式主要影响蛋白表达水平，并不影响mRNA的稳定性。另一种作用方式与siRNA类似，当miRNA与mRNA完全互补配对时，Ago2蛋白通过切割mRNA直接导致其降解，实现基因沉默。总之，当前认为miRNA以何种方式与目的基因作用和miRNA与目的基因的配对程度有关。miRNA与目的基因配对不完全时，miRNA就以抑制目的基因的表达发挥作用；miRNA与目的基因某段序列配对完全时，就可能引起目的基因在互补区断裂而导致基因沉默。另外，miRNAs有时候也导致组氨酸修饰和启动子区的DNA甲基化，从而影响靶基因的表达。

发明基于高通量测序方法，对5例转移性骨肉瘤患者及10名正常人进行测序，获得其miRNA和mRNA的表达数据，进而进行生物信息学分析，选取后备miRNA和mRNA进行分子生物学验证及靶标验证，结果显示，本发明提供的miRNA和mRNA与骨肉瘤密切相关，可用于临床诊断及预防检测，具有很好的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供mir-1292和/或其成熟miRNA在制备诊断和/或防治骨肉瘤试剂中的应用。

mir-1292的序列见序列表SEQ ID NO 1。mir-1292的成熟miRNA为miR-1292-5p和miR-1292-3p序列见序列表SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3。

进一步的，所述骨肉瘤为转移性骨肉瘤。