[发明专利]快速鉴定茎瘤芥杂交种纯度的方法有效
| 申请号： | 201610002597.2 | 申请日： | 2016-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN105506113B | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 沈进娟;刘雪姣;冉广葵;杨仕伟;于晓虎;冷容;范永红;曾胜;李娟 | 申请（专利权）人： | 重庆市渝东南农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 黄书凯 |
| 地址： | 408000 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杂交种 茎瘤芥 引物 杂交种纯度 快速鉴定 筛选 亲本 聚丙烯酰胺凝胶电泳 特异性引物 鉴定周期 结合引物 扩增产物 亲本筛选 十字花科 特异性强 多态性 快速法 准确率 儿菜 条带 白菜 分辨 油菜 改良 检测 应用 | ||
1.快速鉴定茎瘤芥杂交种纯度的方法，包括DNA提取、PCR扩增步骤，其特征在于：所述的PCR扩增步骤中的PCR反应体系中包含以下序列的引物：
SSR Ol11-G11正义链序列：GTTGCGGCGAAACAGAGAAG；
反义链序列：GAGTAGGCGATCAAACCGAG；
另外，还包括以下序列的引物：
SSR Na14-G06正义链序列：AAACGGCTTGCATTGTTCTC；
反义链序列：GGCTTGCTTGATCCAGTCTC；
SSR Ol13-E03正义链序列：CTCTGTTTCCTCTGCCCAAC；
反义链序列：AGGGAAGGAAAGGACACGAC
中的任意一种；
所述的SSR Na14-G06正义链序列的TM值为58℃、反义链序列的TM值为62℃，SSR Ol11-G11、SSR Ol13-E03的正义链序列和反义链序列的TM值均为62℃；
所述的PCR反应体系中的还包括以下各组分：15μL：1×缓冲液，2.5μmol/L MgCl2、150μmol/L dNTP、1U DNA聚合酶和100ng DNA模板，每个引物含量为0.2μmol/L；
所述的PCR扩增的方法为：95℃预变性5min，1个循环；
95℃预变性40s，62℃退火30s，72℃延伸1min，每个循环降1℃，共11个循环；95℃预变性40s，52℃退火40s，72℃延伸1min，共30个循环，72℃再延伸5min；4℃低温保存。
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