[发明专利]一种基于Luminol/Au@branchedPPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法及应用。具体涉及一种Luminol/Au@branched PPy作为基底材料，以Luminol作为发光信号源，构建一种无标记型电致化学发光免疫传感器，属于电化学发光检测技术领域。

背景技术

癌症是威胁人类健康的最严重的疾病之一，虽然恶性肿瘤的治疗技术在不断进步，但是迄今为止，恶性肿瘤的早期发现、早期诊断和早期治疗是最为有效的手段。从筛选的角度来说，早期诊断癌症的最有效的方法是通过血液检查，检测肿瘤标志物的含量。随着生物学技术的发展和研究的深入，人们发现许多肿瘤早期标志物的一个最显著的特点就是其在血清中浓度非常低，而传统的检测肿瘤标志物的方法，如酶联免疫分析法、放射免疫分析法和荧光免疫分析法等，具有放射性污染，操作时间长且灵敏度低等缺点，限制了早期检测肿瘤标志物的临床检测技术的发展。因此，发展高灵敏的免疫分析技术对于肿瘤标志物的早期检测有着至关重要的意义。为了克服以上传统分析方法的缺点，本发明设计了一种特异性强，无放射性污染，快速简便且灵敏度高的电致化学发光免疫分析方法，实现了对肿瘤标志物的早期检测。

发明内容

本发明的目的之一是通过化学聚合法快速、简便合成枝状聚吡咯，其可与金溶胶通过静电作用牢固结合。

本发明的目的之二是合成的枝状聚吡咯导电性好，比表面积大，可以固载大量的金溶胶和鲁米诺，提高了传感器的检测范围和灵敏度。

本发明的目的之三是针对现有的肿瘤标志物检测方法存在的问题，提供一种简单快速可靠的基于Luminol/Au@branched PPy的电化学发光传感器的制备方法和应用，实现对肿瘤标志物的快速、灵敏、特异、高效检测。

本发明的技术方案如下：

1. 一种基于Luminol/Au@branched PPy的电致化学发光免疫传感器的制备方法

（1）依次用1.0、0.3、0.05 µm的氧化铝粉末对直径为4 mm的玻碳电极进行抛光，用超纯水中清洗干净，氮气吹干；

（2）在电极表面滴加6 μL、浓度为1 ~ 3 mg/mL的抗体捕获基底材料Luminol-Au@branched PPy-Ab溶液，4 ^°C保存；

（3）用3 μL、质量分数为0.5 ~ 1.5%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 ^°C冰箱中孵化1 ~ 3 h，清洗干净；

（4）将6 μL、浓度为0.01 pg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原滴涂至电极表面，室温下孵化1 ~ 3 h，清洗干净，于4 ^°C冰箱中储存备用。

2. 抗体捕获基底材料Luminol-Au@branched PPy-Ab溶液的制备

（1）Au@branched PPy的制备

将0.1 ~ 0.3 mol吡咯单体分散于40 ~ 60 mL、体积比为1:1的水和乙醇混合液中，加入0.05 ~ 0.15 mol/L的FeCl₃溶液，搅拌24 h，过滤，用体积比为1:1的水和乙醇混合液洗涤3次，将其置于60 ^°C真空干燥箱中干燥48 h，制得黑色固体branched PPy；

将10 ~ 30 mg branched PPy分散到10 mL超纯水中，加入5 ~ 15 mL金溶胶，将得到的混合溶液在室温下振荡24 h，6000 r/min下离心10 ~ 15 min，洗涤3次，将产物Au@branched PPy重新分散到10 mL超纯水中，制得Au@branched PPy溶液；

（2）Luminol/Au@branched PPy的制备

将1 mL、浓度为1 ~ 3 mg/mL 的Au@branched PPy溶液与1 mL、浓度为0.5 ~ 1.5 mmol/L的Luminol溶液混合，将得到的混合溶液在室温下振荡24 h，6000 r/min下离心洗涤3次，将产物Luminol/Au@branched PPy重新分散于1 mL超纯水中，制得基底材料Luminol/Au@branched PPy溶液；

（3）抗体捕获基底材料Luminol-Au@branched PPy-Ab溶液的制备