[发明专利]用于多路定量核酸扩增的方法和系统

权利要求书

1.一种用于测定至少一种靶核酸分子的存在或不存在的方法，该方法包括：

(a)提供包含含有模板核酸分子的核酸样品、引物对和聚合酶的反应混合物，其中所述引物对与所述模板核酸分子具有序列互补性，并且其中所述引物对包含限制引物和过量引物；

(b)在产生所述至少一种靶核酸分子作为所述模板核酸分子的扩增产物的条件下，使所述反应混合物进行核酸扩增反应；

(c)使所述反应混合物与传感器阵列接触，该传感器阵列具有(i)基底，其包含固定于所述基底的表面上不同的单独可寻址位置的多个探针，其中所述探针配置为与所述限制引物特异地结合，以及(ii)检测器阵列，其被配置为检测来自所述可寻址位置的至少一种信号，其中所述至少一种信号指示在所述限制引物与所述多个探针中的单个探针结合时能量供体与能量受体之间的相互作用，所述能量供体和所述能量受体各自偶联到所述限制引物或者所述多个探针中的所述单个探针；

(d)在所述核酸扩增反应过程中的多个时间点，使用所述检测器阵列检测来自一个或多个所述可寻址位置的所述至少一种信号；以及

(e)基于指示在所述限制引物与所述多个探针中的所述单个探针结合时所述能量供体与所述能量受体之间的相互作用的所述至少一种信号，检测所述至少一种靶核酸分子的所述存在或不存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应混合物包含具有不同核酸序列的多个限制引物，并且所述探针与所述多个所述限制引物特异性结合。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在反应室中提供所述反应混合物，该反应室被配置为容纳所述反应混合物并允许所述探针与所述限制引物结合。

4.根据权利要求1所述的方法，进一步包括通过分析所述探针与所述限制引物的结合速率，将在多个时间点检测到的所述至少一种信号与所述至少一种模板核酸分子的初始浓度相关联。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述探针为寡核苷酸。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述传感器阵列包含至少约100个集成传感器。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述能量受体猝灭所述能量供体的光学活性。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述能量受体与所述限制引物偶联。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述能量受体为猝灭剂。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述能量供体为荧光团。

11.根据权利要求1所述的方法，其中(d)包括测量所述至少一种信号相对于背景的增加。

12.根据权利要求1所述的方法，其中(d)包括测量所述至少一种信号相对于背景的减少。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述传感器阵列包含检测所述至少一种信号的至少一个光检测器。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述光检测器包含互补金属氧化物半导体器件。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述探针经由连接体固定于所述表面。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述连接体包含选自氨基酸、多肽、核苷酸和寡核苷酸的种类。

17.根据权利要求1所述的方法，其中以至少约90％的灵敏度检测所述靶核酸分子。

18.根据权利要求1所述的方法，其中当包含所述靶核酸分子的所述反应混合物与所述传感器阵列流体接触时，检测所述至少一种信号。