[发明专利]调节剂测定

权利要求书

1.一种鉴定能够结合肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员三聚体蛋白质的化合物的方法，其中化合物-三聚体复合物结合必需的TNF超家族受体并调节所述受体的信号传导，其中所述化合物是分子量为1000Da或更小的小分子实体，并且其中所述方法包括：

a)进行测定以确定TNF超家族成员和化合物的样品中三聚体形式的TNF超家族成员的热转变中点(T_m)；与不存在化合物的对照样品比较样品中三聚体形式的TNF超家族成员的T_m；和选择与不存在化合物的三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性相比增加三聚体形式的TNF超家族成员的稳定性的化合物；和

b)测量包含所述化合物的样品中结合至必需受体的三聚体TNF超家族成员的水平，并将结合至必需受体的三聚体TNF超家族成员的水平与对照样品相比较；和

c)使TNF超家族受体与TNF超家族成员和化合物-三聚体复合物接触，并检测测试化合物是否通过TNF超家族受体阻止或减少TNF超家族成员三聚体信号传导。

2.权利要求1的方法，其还包括：

测量化合物与探针化合物对结合三聚体形式的TNF超家族成员的竞争性，和将观察到的竞争水平与对照样品的相应值相比较。

3.权利要求1的方法，其还包括：

对含有TNF超家族成员和所述化合物的样品进行质谱分析，以检测TNF超家族成员三聚体的量，和与对照样品比较样品中TNF超家族成员三聚体的量。

4.权利要求1的方法，其包括：

进行受体-配体结合测定，其中将TNF超家族成员和化合物的样品施加至已结合至表面的必需TNF受体，和与对照样品比较与必需TNF受体结合的TNF超家族成员三聚体的量。

5.权利要求2的方法，其包括：

使用所述化合物和探针化合物进行荧光偏振测定，和将所述探针化合物在所述化合物存在下的偏振度与对照样品中的偏振度进行比较。

6.权利要求1的方法，其中含有TNF超家族成员和所述化合物的样品进一步包含去稳定剂。

7.权利要求6的方法，其中所述去稳定剂是DMSO。

8.权利要求1的方法，其包括进行等温量热分析以测量在所述化合物存在下TNF超家族成员对必需受体的结合，和与对照样品比较TNF超家族成员对必需受体的结合。

9.权利要求1的方法，其中步骤(b)包括测量包含所述化合物的样品中的三聚体TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。

10.权利要求1或9的方法，其包括：

进行测定以确定TNF超家族成员和所述化合物的样品中三聚体形式的TNF超家族成员的针对超家族受体的结合亲和力(K_D-r)，和与对照样品比较样品中三聚体形式的TNF超家族成员的K_D-r。

11.权利要求1的方法，其中所述稳定性的增加导致所述三聚体形式的TNF超家族成员的T_m增加至少1℃。

12.权利要求11的方法，其中所述稳定性的增加导致所述三聚体形式的TNF超家族成员的T_m增加至少10℃。

13.权利要求12的方法，其中所述三聚体形式的TNF超家族成员的T_m的增加为10℃至20℃。

14.权利要求1的方法，其中与不存在所述化合物的情况下TNF超家族成员与其受体的结合亲和力相比，所述化合物增加所述TNF超家族成员与必需受体的结合亲和力。