[发明专利]HCV NS4A/经修饰的NS3多肽及其用途

说明书

本发明描述了经修饰的丙型肝炎病毒多肽。多肽包括HCV NS4a结构域和经修饰的NS3结构域。多肽保留构象表位。还描述了包括多肽的HCV免疫测定。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求提交于2015年3月27日美国临时申请62/139,183的权益。

关于联邦政府资助的研究或开发的声明

不适用。

技术领域

本发明整体涉及丙型肝炎病毒(HCV)构建体和使用其的方法。更具体地，本发明涉及具有NS4a和经修饰的NS3结构域的免疫原性、免疫反应性HCV多肽。经修饰的多肽保留构象表位并因此可用于诊断HCV感染的免疫测定。

背景技术

丙型肝炎病毒(HCV)是肠胃外非甲型非乙型肝炎(NANBH)的主要原因，其主要通过身体输血和体液交换来传播。该病毒存在于0.4％至2.0％的美国普通人群中。在约50％的感染者中产生慢性肝炎，其中约20％被感染的个体产生肝硬化，有时导致肝细胞癌。因此，研究和控制该疾病在医学上是重要的。

Houghten等人首先鉴定并表征HCV是NANBH的原因。HCV的病毒基因组序列是已知的，用于获得该序列的方法也是已知的。参见例如国际公布WO 89/04669；WO 90/11089；和WO 90/14436。HCV具有9.5kb的正义单链RNA基因组，其是黄病毒家族的成员。基于系统发育分析，已鉴定出至少六个不同但相关的HCV基因型(Simmonds等人，J.Gen.Virol.(1993)74:2391-2399)。该病毒编码一个具有多于3000个氨基酸残基的多蛋白(Choo等人，Science(1989)244:359-362；Choo等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)88:2451-2455；Han等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)88:1711-1715)。多蛋白在翻译的同时或之后被加工成结构和非结构(NS)蛋白这两者。

具体地，由HCV基因组编码几种蛋白质。HCV多蛋白的裂解产物的顺序和命名如下：NH₂-C-E1-E2-P7-NS2-NS3-NS4a-NS4b-NS5a-NS5b-COOH。宿主蛋白酶催化多蛋白的最初裂解，释放三种结构蛋白，即N-末端核衣壳蛋白(称为“核心”)和两种包膜糖蛋白“E1”(也称为E)和“E2”(也称为E2/NS1)，以及含有病毒酶的非结构(NS)蛋白。将NS区称为NS2、NS3、NS4、NS4a、NS4b、NS5a和NS5b。NS2是具有蛋白水解活性的膜内在蛋白。NS2单独或与NS3组合，切割NS2-NS3酰胺(sissle)键，继而产生NS3N-末端并释放具有丝氨酸蛋白酶和RNA解旋酶活性这两者的大的多蛋白。NS3蛋白酶用于加工剩余的多蛋白。具体地，HCV NS3蛋白质是630个氨基酸的蛋白质，包含三个功能结构域。丝氨酸样蛋白酶结构域位于氨基末端，而螺旋酶和NTP酶活性处于羧基末端。NS3的丝氨酸蛋白酶负责在NS3/4a、NS4a/b、NS4b/5a和NS5a/b的连接处切割。

已描述了许多可用作HCV的免疫学和诊断试剂的、衍生自HCV多蛋白的一般和特异性多肽。参见例如Houghton等人，欧洲专利公开No.318,216和388,232；Choo等人，Science(1989)244:359-362；Kuo等人，Science(1989)244:362-364；Houghton等人，Hepatology(1991)14:381-388；Chien等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1992)89:10011-10015；Chien等人，J.Gastroent.Hepatol.(1993)8:S33-39；Chien等人，国际公布No.WO 93/00365；Chien,D.Y.，国际公布No.WO 94/01778。这些出版物通常对HCV和HCV多肽免疫学试剂的制备和使用提供了广泛的背景。因此，为简便起见，这些出版物的公开内容以引用方式并入本文。