[发明专利]用于鉴定和富集包含位点特异性基因组修饰的细胞的方法和组合物

权利要求书

1.一种将转基因整合到玉蜀黍基因组中的基因组核酸酶切割位点的方法，该方法包括将以下各项引入玉蜀黍细胞中：

a)包括至少100个连续核苷酸并且进一步包括转基因的第一核酸分子，其中所述至少100个连续核苷酸具有在从包括下列各项的组中选择的核苷酸序列中的靶位点：SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67；以及

b)包括编码核酸酶的核苷酸序列的第二核酸分子，该核酸酶用于在与对应于(a)的至少100个连续核苷酸的从包括下列各项的组中选择的核苷酸序列相邻的基因组核酸酶切割位点处定点切割：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67，

该引入在这样的条件下进行，即该第二核酸分子的表达可以发生以产生核酸酶并且该核酸酶可以在基因组核酸酶切割位点处切割核苷酸序列，由此转基因被整合到玉蜀黍基因组中的基因组核酸酶靶切割位点处。

2.如权利要求1所述的方法，其中该基因组核酸酶切割位点位于染色体1上的染色体区间内，该染色体区间由以下定义并且包括以下：如由玉蜀黍B73 RefGen_V2定义的碱基对(bp)位置38,860,000至碱基对(bp)位置39,015,000。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该第一核酸分子和该第二核酸分子通过基因枪核酸递送被引入到玉蜀黍细胞中。

4.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该第一核酸分子和该第二核酸分子经由农杆菌被引入到玉蜀黍细胞中。

5.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该第一核酸分子和该第二核酸分子存在于单个核酸构建体上。

6.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该第一核酸分子和该第二核酸分子存在于单独的核酸构建体上。

7.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该第一核酸分子和/或该第二核酸分子在玉蜀黍细胞中瞬时表达。

8.一种产生玉蜀黍植物或植物部分或其子代的方法，该玉蜀黍植物或植物部分或其子代包括整合到玉蜀黍基因组中的基因组核酸酶切割位点中的转基因，该方法包括从通过如权利要求1所述的方法产生的玉蜀黍细胞再生玉蜀黍植物。