[发明专利]显现单个细胞中的修饰的核苷酸和核酸相互作用

权利要求书

1.用于显现细胞中特异性核酸序列中的修饰的核苷酸的非疾病诊断方法，所述方法包括：

a）使制备的细胞与至少一种核酸探针接触，所述至少一种核酸探针用至少一种标记物标记且与所述特异性核酸序列互补，其中所述制备的细胞是固定的，透化的，并且任选地包含变性的染色体DNA，并且其中所述核酸探针与所述特异性核酸序列杂交以形成杂交细胞；

b）使所述杂交细胞与结合所述核酸探针的标记物的第一结合剂和结合所述修饰的核苷酸的第二结合剂接触；

c）通过邻近连接测定法检测所述第一和第二结合剂以显现细胞中的特异性核酸序列中的修饰的核苷酸。

2.权利要求1的方法，其中所述修饰的核苷酸选自5-甲基胞苷、3-甲基胞苷、5-羟甲基胞苷、5-甲酰基胞苷、5-羧基胞苷、1-甲基腺苷、6-甲基腺苷、7-甲基鸟苷、黄嘌呤核苷、肌苷、二氢尿苷或假尿苷或具有2'-O-甲基化的修饰的核糖。

3.权利要求1或2的方法，其中所述特异性核酸序列选自启动子DNA、增强子DNA、CpG岛DNA、编码DNA、内含子DNA、信使RNA、微小RNA、非编码RNA、长非编码RNA、核糖体RNA、转移RNA、小核RNA、小核仁RNA、SmY RNA、Y RNA、剪接的前导RNA、端粒酶RNA组分、小干扰RNA、Piwi-相互作用RNA或反式作用RNA。

4.权利要求1或2的方法，其中所述标记物是选自生物素、洋地黄毒苷、二硝基苯基、荧光素、二乙基氨基香豆素、罗丹明、花青3、花青5或德克萨斯红的半抗原或染料。

5.权利要求1或2的方法，其中所述核酸探针是线性或环状的，包含DNA、RNA、LNA或其组合，并且具有15个核苷酸至500个核苷酸的长度。

6.权利要求1或2的方法，其中所述细胞是选自真核细胞的个体细胞，或者所述细胞在获得自真核生物的组织样品或流体样品内。

7.权利要求1或2的方法，其中所述修饰的核苷酸是5-甲基胞苷，且所述特异性核酸序列是Septin 9启动子。

8.权利要求1或2的方法，其中所述细胞是选自哺乳动物细胞的个体细胞。

9.权利要求1或2的方法，其中所述细胞是选自人细胞的个体细胞。

10.权利要求1或2的方法，其中所述细胞是选自正常细胞或癌细胞的个体细胞。