[发明专利]原始肠内胚层细胞及其制作方法

说明书

本发明提供用于廉价稳定并且大量地诱导人器官细胞的基盘技术。也提供在使多能性干细胞分化之后，实施至少1次以上传代之后诱导的细胞，其中，作为未分化(多能性)细胞标志物的NANOG，OCT4，MYC，LIN28A是阴性，作为内胚层细胞标志物的CXCR4，CER1，HHEX，GATA4是阴性，作为肠内胚层细胞标志物的CDX2，HOXB9是阳性，再者，作为间充质细胞标志物的Brachyury(T)是阴性，作为胰腺细胞标志物的PDX1是阴性，可至少分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞的细胞。上述细胞的制作方法及扩增方法、使用上述细胞制作器官细胞的方法、冷冻－保存上述细胞，构建用于制造器官细胞的工作细胞库的方法。

【技术领域】

本发明涉及原始肠内胚层细胞及其制作方法，更具体而言，涉及能分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞的内胚层细胞及其制作方法。

【背景技术】

近年，关注利用自iPS/ES细胞等的多能性干细胞诱导的组织－器官而开发新的药品的药物开发筛选或补救丧失的器官的功能的再生医疗实现化(Takebe，et al.Nature，499：481-484，2013(非专利文献1)、WO2013/047639：组织及器官的制作方法(专利文献1))。

为了实现对于使用人iPS细胞的肝疾病的再生治疗，“超大量”的人肝细胞的GMP等级的制造技术变得必要。例如，为了使人成体肝脏的约30％的功能替代成为可能，对于1名患者，作为肝细胞数，移植6×10¹⁰个细胞植活是必须条件。一方面，对于这些超大量的人肝细胞制造，在通过由既有的现有技术的分化诱导流程尝试细胞调制时，如果考虑到移植效率，则1人的肝移植待机患者的治疗需要约95亿日元的莫大的成本，由我们的成本试算确证。

【现有技术文献】

【非专利文献】

非专利文献1：Takebe，et al.Nature，499：481-484，2013

【专利文献】

专利文献1：WO2013/047639A1

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

对于肝疾病的再生治疗费用的大部分是从人iPS细胞的分化诱导所要求的细胞因子等的分化诱导因子，所以以大幅的成本削减作为目的，作为在自人iPS细胞向器官细胞的分化过程中极重要的中间阶段，设定“原始肠内胚层细胞(PGECs)”被认为是极有利的战略。即，由分化诱导期间大幅缩短，每分化诱导的偏差最小化等，成为用于廉价稳定并且大量地诱导人器官细胞的技术基盘。

作为解决这样的技术性障碍的方法，近年，尝试了以下的3个方法。(1)自iPS细胞诱导的内胚层前体细胞(Cell Stem Cell.2012 Apr 6；10(4)：371-84.、WO 2012178215A1)、(2)前肠内胚层细胞(Stem Cell Report，Vol1，293-306，2013)、(3)由直接重编程得到的多能性内胚层细胞(Nature 508，93-97，2014)。是扩增由各(1)～(3)的方法制作的中间阶段的细胞，在功能细胞的分化诱导中使用的方法。但是，在(1)中，由于以小鼠细胞作为饲养者使用，难以临床应用。从在(2)中，从扩增的细胞诱导的细胞的分化功能显著地低，在(3)的方法中，扩增的细胞的安全性成为课题，即，确认CXCR4等的转移等的与癌的恶性度有关系的标志物表达等的问题来看，在各细胞中，难以在医疗－产业应用中使用是现状。

本发明以解决这些现有技术的问题作为目的。

【解决课题的技术方案】