[发明专利]通过质谱测定糖胺聚糖水平

权利要求书

1.一种测定生物样品中糖胺聚糖水平的方法，所述方法包括以下步骤：

a)在使糖胺聚糖消化从而产生二糖混合物的条件下用一种或多种酶孵育生物样品；

b)化学衍生化步骤a)中产生的所述二糖混合物；

c)测量每种单个衍生的二糖的量；

d)基于在步骤c)测量的每种单个衍生的二糖的量来测定所述生物样品中的所述糖胺聚糖水平,其中所述步骤c)包括：

(i)通过色谱分离单个衍生的二糖；和

(ii)通过质谱测量每种单个衍生的二糖，和

其中与内标相比测量每种单个衍生的二糖的量，并且其中用4-丁基苯胺衍生化每种单个二糖，用¹³C₆-4-丁基苯胺标记每种相应二糖的内标。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述糖胺聚糖包括硫酸乙酰肝素。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述一种或多种酶包括一种或多种肝素酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述一种或多种肝素酶包括肝素酶I、II和/或III。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述一种或多种酶包括一种或多种选自软骨素酶AC、软骨素酶B、软骨素酶C、软骨素酶ABC和角质素酶的酶。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述二糖混合物包括二糖I-S(ΔUA，2S-GlcNS，6S)、II-S(ΔUA-GlcNS，6S)、III-S(ΔUA，2S-GlcNS)、IV-S(ΔUA-GlcNS)、II-A(ΔUA-GlcNAc，6S)和/或IV-A(ΔUA-GlcNAc)。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述测量包括测量衍生的I-S(ΔUA，2S-GlcNS，6S)、衍生的II-S(ΔUA-GlcNS，6S)、衍生的III-S(ΔUA，2S-GlcNS)、衍生的IV-S(ΔUA-GlcNS)、衍生的II-A(ΔUA-GlcNAc，6S)和衍生的IV-A(ΔUA-GlcNAc)各自的量。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中用疏水部分衍生化所述二糖混合物。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其中用4-丁基苯胺、2-氨基苯甲酰胺、2-氨基苯甲酸或2-氨基吖啶酮衍生化所述二糖混合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述色谱是反相液相色谱。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其中基于所测量的每种单个二糖的量的总计二糖浓度值来测定所述生物样品中的所述糖胺聚糖水平。

12.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生物样品是脑脊液样品。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述脑脊液样品的体积范围为约10μl至100μl。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述脑脊液样品的体积范围为约45μl至55μl。

15.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生物样品是血液样品。

16.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生物样品是血浆样品或尿液样品。

17.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生物样品首先被加工以提取糖胺聚糖。

18.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述生物样品含有浓度大于0.1μM的糖胺聚糖。