[发明专利]一种可溶的异质二聚T细胞受体及其制法和应用

权利要求书

1.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，在所述TCR的α链和β链的恒定区中引入半胱氨酸残基以形成人工链间二硫键，并且所述TCR的Tm值≥45℃；

并且，形成人工链间二硫键的半胱氨酸残基替换了：

TRAC*01外显子1的53R与TRBC1*01外显子1的54S，或TRAC*01外显子1的53R与TRBC2*01外显子1的54S；或

TRAC*01外显子1的10Y与TRBC1*01外显子1的20E，或TRAC*01外显子1的10Y与TRBC2*01外显子1的20E；

并且，所述的TCR为人TCR。

2.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR包含(ⅰ)除其跨膜结构域以外的全部或部分TCRα链，和(ⅱ)除其跨膜结构域以外的全部或部分TCRβ链，其中(ⅰ)和(ⅱ)均包含TCR链的功能性可变结构域和至少一部分恒定结构域，所述恒定结构域包含权利要求1中的所述位置的半胱氨酸残基的替换以形成人工链间二硫键。

3.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR是可溶的。

4.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR中不存在天然链间二硫键。

5.如权利要求4所述的TCR，其特征在于，所述TCR中将天然TCR的C末端截短以去除形成所述天然链间二硫键的半胱氨酸残基。

6.如权利要求4所述的TCR，其特征在于，所述TCR中形成所述天然链间二硫键的半胱氨酸残基被替换为另一残基。

7.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR的β链恒定区中不存在未配对的半胱氨酸残基。

8.如权利要求7所述的TCR，其特征在于，所述TCRβ链恒定区中未配对的半胱氨酸残基被替换为丙氨酸或丝氨酸。

9.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α链和/或β链的C-或N-末端结合有偶联物。

10.如权利要求9所述的TCR，其特征在于，与所述TCR结合的偶联物为可检测标记物、治疗剂、PK修饰部分或其组合。

11.如权利要求10所述的TCR，其特征在于，与所述TCR结合的治疗剂为连接于所述TCR的α或β链的C-或N-末端的抗-CD3抗体。

12.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1-11中任一所述的TCR的α链和β链的核酸序列。

13.一种载体，所述的载体含有权利要求12所述的核酸分子。

14.一种宿主细胞，所述的细胞含有权利要求13所述的载体或染色体中整合有外源的权利要求12所述的核酸分子，并且，所述的宿主细胞选自大肠杆菌、酵母细胞和CHO细胞。

15.一种分离的细胞，其特征在于，其呈递权利要求1所述的TCR，并且，所述的细胞为T细胞。

16.一种制备权利要求1所述的TCR的方法，包括步骤：

(i)培养权利要求14所述的宿主细胞，从而表达权利要求1所述的TCR的α链和β链；

(ii)分离或纯化出所述的α链和β链；

(iii)重折叠所述的α链和β链，获得所述TCR。

17.一种T细胞受体复合物，其特征在于，所述的复合物含有一个或多个权利要求1-11中任一所述的TCR。