[发明专利]上调癌干细胞标志物以产生抗原特异性细胞毒性效应T细胞的方法

权利要求书

1.一种组合物，其包含通过与至少一种结肠直肠癌干细胞或其碎片接触而被脉冲的至少一种分离的免疫系统细胞，其中所述结肠直肠癌干细胞通过使至少一种分化的结肠直肠瘤细胞逆转以具有未分化的结肠直肠干细胞状态来获得。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述分离的免疫系统细胞是抗原呈递细胞。

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述抗原呈递细胞是成熟树突细胞。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述成熟树突细胞从已通过与所述至少一种结肠直肠癌干细胞或其碎片接触而被脉冲的未成熟树突细胞衍生。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述成熟树突细胞具有上调的CD83、CD40和CD86表达。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述结肠直肠癌干细胞是通过在体外使至少一种分化的肿瘤细胞逆转至未分化的结肠直肠干细胞状态获得的体外(试管)结肠直肠干细胞。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述结肠直肠癌干细胞是经热激的结肠直肠癌干细胞或其碎片。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述碎片是经热激结肠直肠癌干细胞的裂解物。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述结肠直肠癌干细胞是表达能够在体外使分化的结肠直肠瘤细胞逆转或重编程为未分化的结肠直肠癌干细胞状态的转录因子的未分化结肠直肠癌干细胞。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述未分化结肠直肠癌干细胞通过用能够使分化的结肠直肠瘤细胞逆转或重编程为未分化的结肠直肠癌干细胞的转录因子重编程所述分化的结肠直肠瘤细胞来获得。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述结肠直肠癌干细胞通过用选自Oct4和Sox2的细胞编程因子或转录因子逆转或重编程所述分化的结肠直肠瘤细胞来获得。

12.一种用于刺激对象的免疫系统的组合物，其包含通过与从结肠直肠癌干细胞获得的一种或更多种抗原接触而被脉冲的至少一种抗原呈递细胞，其中所述结肠直肠癌干细胞通过使至少一种分化的结肠直肠瘤细胞逆转以具有未分化的结肠直肠干细胞状态来获得，其中所述逆转通过用选自Oct4和Sox2的细胞重编程因子或转录因子重编程从所述对象获得的所述分化结肠直肠瘤细胞来实现。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述抗原呈递细胞和所述结肠直肠瘤细胞二者从同一或不同对象获得。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的组合物，其中使用杆状病毒载体来将所述细胞重编程因子或转录因子递送到所述结肠直肠瘤细胞中，所述杆状病毒载体包含锌指核酸酶编码序列以及含有所述细胞重编程因子或转录因子的融合基因。

15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述未分化结肠直肠干细胞状态以下列至少一项为特征：

(a)上皮特征丧失且E-钙粘蛋白表达降低，

(b)获得间充质特性且波形蛋白(VIM)、纤连蛋白(FN1)、玻连蛋白(VTN)、N-钙粘蛋白(CDH2)、snail(SNAI1)、twist(TWIST1)、锌指E盒结合同源框1(ZEB1)、转化生长因子β1(TGFB1)、slug(SNAI2)和SOX4差异表达；以及

(c)表达选自由以下组成的组的癌干细胞标志物：CD24、CS133、CD144、CD166、醛脱氢酶1(ALDH1A1)、含有富亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)、二肽基肽酶4(DPP4)、连环蛋白β-1(CTNNB1)、ATP结合盒亚家族G成员5(ABCG5)和整联蛋白β-1(ITGB1)。

16.一种用于脉冲树突细胞使得所述树突细胞能够诱导细胞毒性T淋巴细胞针对体外结肠直肠癌干细胞的特异性免疫应答的组合物，所述组合物包含已从经重编程的体外结肠直肠癌细胞富集的至少一种体外结肠直肠癌干细胞样细胞或其碎片。

17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述特异性免疫应答的所述诱导包括将来源于所述体外结肠直肠癌干细胞的抗原呈递至T细胞群以及诱导所述T细胞群分化成所述细胞毒性T淋巴细胞，其中所述细胞毒性T淋巴细胞对所述抗原具有特异性。