[发明专利]化合物和方法

说明书

本发明提供了使用光化学内化方法在细胞表面上表达抗原分子或其部分的方法，其中使用细胞因子，优选GM‑CSF来增强该方法。该方法可用于刺激免疫反应和用于各种治疗或预防方法。包含用于该方法的组分的药物组合物或试剂盒、通过该方法产生的细胞及其在治疗和预防中的用途也形成本发明的多个方面。

本发明涉及一种疫苗接种或免疫的方法，其涉及使用光敏剂、抗原分子例如疫苗组分和增强光化学内化(PCI)介导的疫苗接种(其是本文定义的细胞因子)的效果的试剂，以及使用波长能有效激活光敏剂的光进行照射。本发明还涉及可用于这种方法的抗原性组合物，例如疫苗组合物。本发明还提供了产生抗原呈递细胞的方法，所述细胞可用于产生免疫应答，例如用于疫苗接种，所述方法涉及使用与上述相同的组分以将抗原分子例如疫苗组分引入细胞以实现抗原呈递，以及用于这种方法的抗原组合物。本发明还提供了通过这种方法在体外产生的细胞施用于患者体内以引发免疫反应例如实现疫苗接种的用途。还提供了将抗原分子内化到细胞中的方法。

疫苗接种涉及施用抗原分子以激发免疫系统从而刺激对病原体的适应性免疫的发展。疫苗可以预防或改善感染的发病率。疫苗接种是预防传染病的最有效方法，由于疫苗接种引起的广泛免疫是全世界根除天花和使世界上许多地方免受脊髓灰质炎、麻疹和破伤风等疾病肆虐的主要原因。

疫苗的活性剂可以是致病病原体的完整但失活(非感染性)的形式或减毒(具有降低的感染性)的形式，或者是已被发现具有免疫原性的病原体的纯化组分(例如，例如病毒的外部衣壳蛋白)。类毒素(toxoid)被生产以用于针对基于毒素的疾病的免疫，例如改造破伤风的破伤风毒素以去除其毒性作用，但保持其免疫原性效应。

由于大多数疫苗通过内吞作用被抗原呈递细胞吸收，并通过内体转运到溶酶体用于抗原消化和通过MHC II类途径呈递，接种主要激活CD4T辅助细胞和B细胞。为了与病症或疾病如癌症以及细胞内感染作斗争，重要的是刺激细胞毒性CD8T细胞应答。然而，因为难以将抗原递送至细胞质和抗原呈递的MHC I类途径，细胞毒性CD8T细胞的诱导通常失败。光化学内化(PCI)改善分子进入细胞溶质的递送，并且采用PCI的疫苗接种方法是已知的。PCI是使用光敏剂并结合照射步骤以激活该试剂的技术，并且已知实现将共同施用于细胞的分子释放到细胞的细胞质中。这种技术允许被细胞摄取的分子进入细胞器例如内体，在照射后从这些细胞器释放到细胞质中。PCI提供了以不会导致广泛的细胞破坏或细胞死亡的方式将本不可透膜(或不易渗透)的分子引入细胞的细胞质中的机制。

光化学内化(PCI)的基本方法描述于WO 96/07432和WO 00/54802中，其通过引用并入本文。在这些方法中，使待内化的分子(在本发明中其将是抗原分子)和光敏剂与细胞接触。光敏剂和待内化的分子被吸收到细胞内的细胞膜结合的亚室中，即它们被内吞到细胞内囊泡(例如溶酶体或内体)中。当细胞暴露于适当波长的光时，光敏剂被激活，其直接或间接产生破坏细胞内囊泡膜的反应性物质。这允许内化分子释放到细胞质中。

据发现，在这方法中，大多数细胞的功能或活力没有受到有害影响。因此，提出了称为“光化学内化”的这种方法的用途，用于将多种不同分子(包括治疗剂)运输到细胞质中，即进入细胞内部。

WO 00/54802利用这种一般方法在细胞表面上呈递或表达转移分子。因此，在将分子运输和释放到细胞质中之后，其(或该分子的一部分)可以被运输到细胞的表面，在该处它可以呈递于细胞外部，即在细胞表面上。这种方法在疫苗接种领域具有特殊的用途，其中疫苗组分即抗原或免疫原可以被引入细胞中用于呈递在该细胞的表面上，以便诱导、促进或增强免疫应答。

尽管疫苗接种已经取得了一些值得注意的成功，但仍然需要替代的和改进的疫苗接种方法。本发明解决了这种需要。

有利地，本发明人惊奇地发现以下方法能改善疫苗接种或改善免疫应答，该方法涉及使用光敏剂、抗原分子例如疫苗组分，以及作为如本文所定义的细胞因子的试剂，并用波长能有效激活光敏剂的光进行照射。

如将在下面的实施例中更详细地描述的，本发明的方法提供改进的疫苗接种或改善的免疫应答，例如产生增加量的抗原特异性T细胞。预期实现了协同效应。