[发明专利]用于改善的蛋白质产生的组合物和方法在审
| 申请号： | 201580055291.7 | 申请日： | 2015-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN106795503A | 公开（公告）日： | 2017-05-31 |
| 发明（设计）人： | S·M·马德里 | 申请（专利权）人： | 丹尼斯科美国公司 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C07K14/37;C12N9/04;C12N9/06;C12N9/30;C12N15/67;C12N15/80;C12R1/885 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所11247 | 代理人： | 陈迎春,黄革生 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 改善 蛋白质 产生 组合 方法 | ||
1.一种用于由宿主细胞产生铜酶(cuproenzyme)的方法，包括：
在表达铜酶的宿主细胞中过表达铜金属伴侣蛋白，以及
在足以产生所述铜酶的条件下培养所述宿主细胞，
其中当在基本上相同的培养条件下培养时，与不过表达所述铜金属伴侣蛋白的相应宿主细胞相比，所述宿主细胞产生增加的量的所述铜酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述铜酶是从所述宿主细胞中分泌的。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述铜酶选自由以下项构成的组：裂解性多糖单加氧酶(LPMO)、漆酶、酪氨酸酶、胺氧化酶、胆红素氧化酶、儿茶酚氧化酶、多巴胺β-单加氧酶、半乳糖氧化酶、己糖氧化酶、L-抗坏血酸氧化酶、肽基甘氨酸单加氧酶、多酚氧化酶、槲皮素2,3-双氧化酶、以及过氧化物歧化酶。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述铜酶与所述宿主细胞是内源的。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述铜酶与所述宿主细胞是异源的。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中通过源自所述宿主细胞的启动子控制所述铜酶和/或所述铜金属伴侣蛋白的表达。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述宿主细胞为里氏木霉(Trichoderma reesei，T.reesei)细胞，并且所述启动子为源自里氏木霉的丙酮酸激酶(pki)或纤维二糖水解酶I(cbh1)启动子。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞表达至少一种另外的铜酶，其中在基本上相同的培养条件下，与不过表达所述铜金属伴侣蛋白的相应宿主细胞相比，所述至少一种另外的铜酶的产生水平增加。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述铜金属伴侣蛋白为膜结合的铜转运ATP酶。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述膜结合的铜转运ATP酶包含与SEQ ID NO:6具有至少60％同一性的氨基酸序列。
11.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述膜结合的铜转运ATP酶选自表2中列出的那些。
12.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述铜金属伴侣蛋白为可溶性铜转运蛋白。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述可溶性铜转运蛋白包含与SEQ ID NO:3具有至少60％同一性的氨基酸序列。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述可溶性铜转运蛋白选自表1中列出的那些。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，还包括在所述宿主细胞中过表达第二铜金属伴侣蛋白。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述第一铜金属伴侣蛋白为包含与SEQ ID NO:6具有至少60％同一性的氨基酸序列的膜结合的铜转运ATP酶，并且所述第二铜金属伴侣蛋白为包含与SEQ ID NO:3具有至少60％同一性的氨基酸序列的可溶性铜转运蛋白。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞为丝状真菌宿主细胞。
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