[发明专利]用于变应原的选择性定量与检测的系统和方法

权利要求书

1.一种选择候选特征肽用于从基于植物的样品中定量已知的变应原及潜在变应原的方法，包括：

(a)基于与至少一种已知变应原蛋白质序列的同源性鉴定潜在变应原；

(b)进行所述至少一种已知变应原与步骤(a)中鉴定的潜在变应原的序列比对；

(c)基于所述序列比对选择共有序列或代表性序列；

(d)基于来自步骤(c)中选择的共有序列或代表性序列的序列比对和计算机消化数据的保守区域或结构域，确定多个候选特征肽；和

(e)基于所述特征肽的测量，定量所述基于植物的样品中的所述至少一种已知变应原和潜在变应原的量。

2.权利要求1的方法，其中所述定量步骤使用柱色谱和质谱。

3.权利要求1的方法，其中所述定量步骤包括使用高分辨率精确质量质谱(HRAM MS)测量所述多个候选特征肽。

4.权利要求1的方法，其中所述定量步骤包括从质谱计算所述候选特征肽的相应峰高度或峰面积。

5.权利要求1的方法，其中所述定量步骤包括将来自质谱的高碎裂模式和低碎裂模式的数据进行比较。

6.权利要求1的方法，其中所述至少一种已知的变应原包括Gly m Bd 28K、Gly m Bd 30K、Kunitz胰蛋白酶抑制剂1、Kunitz胰蛋白酶抑制剂3、Gly m 8(2S白蛋白)、凝集素或脂加氧酶。

7.权利要求1的方法，其中所述潜在的变应原包括选自下组的至少一种序列：

(a)对于Gly m Bd 28K为SEQ ID NO:21和29-33；

(b)对于Gly m Bd 30K为SEQ ID NO:22和43-44；

(c)对于Kunitz胰蛋白酶抑制剂1为SEQ ID NO:23和53-54；

(d)对于Kunitz胰蛋白酶抑制剂3为SEQ ID NO:24和62-63；

(e)对于Gly m 8(2S白蛋白)为SEQ ID NO:25和72-74；

(f)对于凝集素为SEQ ID NO:26和83-90；

(g)对于脂加氧酶为SEQ ID NO:27和96-104。

8.权利要求1的方法，其中所述候选特征肽包含选自下组的至少一种序列：

(a)对于Gly m Bd 28K为SEQ ID NO:9和34-42；

(b)对于Gly m Bd 30K为SEQ ID NO:10和45-51；

(c)对于Kunitz胰蛋白酶抑制剂1为SEQ ID NO:7和55-60；

(d)对于Kunitz胰蛋白酶抑制剂3为SEQ ID NO:8和64-71；

(e)对于Gly m 8(2S白蛋白)为SEQ ID NO:11和75-81；

(f)对于凝集素为SEQ ID NO:91-94；和

(g)对于脂加氧酶为SEQ ID NO:105-120。

9.权利要求1的方法，其中所述基于植物的样品包含大豆种子或大豆种子的部分。

10.一种用于在基于植物的样品中定量一种或多种具有已知氨基酸序列的目标蛋白质的系统，所述系统包括：

(a)用于从基于植物的样品中提取蛋白质的高通量手段；

(b)用于以至少一种蛋白酶消化所提取的蛋白质的处理模块；

(c)用于在单个步骤中分离肽的分离模块；

(d)选择模块，用于为至少一种已知的变应原和潜在的变应原选择多个特征肽；和

(e)用于测量多个特征肽的质谱法。

11.权利要求10的系统，其中所述分离模块包括柱色谱。

12.权利要求11的系统，其中所述柱色谱包括液相柱色谱。

13.权利要求10的系统，其中所述质谱包括高分辨率精确质量质谱(HRAM MS)。

14.权利要求10的系统，其中所述选择模块使用根据权利要求1的方法。

15.权利要求10的系统，其中所述至少一种已知的变应原包括Gly m Bd 28K、Gly m Bd 30K、Kunitz胰蛋白酶抑制剂1、Kunitz胰蛋白酶抑制剂3、Gly m 8(2S白蛋白)、凝集素、或脂加氧酶。