[发明专利]来自含有聚集的酪蛋白的混合物的可溶性蛋白的分离

权利要求书

1.从含有聚集的酪蛋白的材料中分离至少一种可溶性蛋白级分的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供所述含有聚集的酪蛋白的材料；

(ii)使所述含有聚集的酪蛋白的材料与色谱支持物接触，允许在所述含有聚集的酪蛋白的材料中存在的一种或多种可溶性蛋白被所述色谱支持物保留；

(iii)从所述色谱支持物获得包含聚集的酪蛋白的透过物级分；

(iv)任选地洗涤所述色谱支持物；

(v)使所述色谱支持物经历至少一种洗脱缓冲液，从所述色谱支持物获得至少一种可溶性蛋白级分；以及

其中所述色谱支持物包含能够结合来自所述含有聚集的酪蛋白的材料的所述可溶性蛋白的一种或多种混合模式配体。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种可溶性蛋白至少为被所述色谱支持物保留的所述含有聚集的酪蛋白的材料中存在的可溶性蛋白免疫球蛋白G或β-酪蛋白以及α-乳白蛋白和/或β-乳球蛋白中的至少一种。

3.如权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述混合模式配体包含至少一个疏水性部分和至少一个可带电部分。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述混合模式配体包含至少一个疏水性部分、至少一个可带电部分和至少一个非芳族氮部分。

5.如权利要求1或2中任一项所述的方法，其中所述色谱支持物包含具有共价连接的一种或多种混合模式配体的多孔有机聚合物基体基质，所述一种或多种混合模式配体包含疏水性部分和非芳族氮部分。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述疏水性部分为烃基部分、任选取代的芳族或杂芳族部分或它们的组合。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述烃基部分为无支链的烃基部分。

8.如权利要求6-7中任一项所述的方法，其中所述烃基部分包含至少3个碳原子、如至少4个碳原子、例如至少5个碳原子。

9.如权利要求6-4中任一项所述的方法，其中所述非芳族氮部分中的氮与所述烃基部分中的碳之间的比率为至少1:3、如至少1:4、例如至少1:5、如至少1:6、例如至少1:7、如至少1:8、例如至少1:9、如至少1:10。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述混合模式配体包含至少一个可带电部分，优选地所述至少一个可带电部分为具有至多11.0、如至多10.0、例如至多9.0、如至多8.0、例如至多7.0、如至多6.0、例如至多5.0的pKa值的碱性部分。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一个可带电部分在牛奶的天然pH，优选在pH 6-8范围中的pH值为带正电荷的部分。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述非芳族氮包含伯氨基、仲氨基、叔氨基或季氨基。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述配体的分子量为至多1000道尔顿、如至多750道尔顿、例如至多500道尔顿、如至多250道尔顿、例如至多100道尔顿、例如至多50道尔顿。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一种可溶性蛋白级分包含选自以下的至少一种可溶性蛋白∶免疫球蛋白G、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白、乳过氧化物酶、乳铁蛋白、骨桥蛋白、纤溶酶原、转铁蛋白、蛋白胨如PP3、碱性磷酸酶、脂肪酶和可溶性酪蛋白如β-酪蛋白。

15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中获得两种可溶性蛋白级分：包含β-酪蛋白的第一可溶性蛋白级分和包含一种或多种可溶性蛋白的第二可溶性蛋白级分，所述一种或多种可溶性蛋白选自免疫球蛋白G、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白、乳过氧化物酶、乳铁蛋白、骨桥蛋白、纤溶酶原、转铁蛋白、蛋白胨如PP3、碱性磷酸酶和脂肪酶。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中获得三种可溶性蛋白级分：包含β-酪蛋白的第一可溶性蛋白级分和包含β-乳球蛋白的第二可溶性蛋白级分，以及包含一种或多种可溶性蛋白的第三可溶性蛋白级分，所述一种或多种可溶性蛋白选自免疫球蛋白G、α-乳白蛋白、血清白蛋白、乳过氧化物酶、乳铁蛋白、骨桥蛋白、纤溶酶原、转铁蛋白、蛋白胨如PP3、碱性磷酸酶和脂肪酶。