[发明专利]XA因子解毒剂的冻干制剂

说明书

本公开涉及Xa因子(fXa)解毒剂的溶液和制备其冻干制剂的方法。适用于冻干的合适水性制剂可包括fXa解毒剂、增溶剂、稳定剂和结晶组分，其中所述制剂在冻干期间不崩塌。

相关专利申请的交叉引用

本申请依据35U.S.C.§119(e)要求2014年8月20日提交的美国临时申请62/039809的权益，所述临时申请针对所有目的以引用的方式整体并入本文。

背景

抗凝血剂在市场上用于治疗或预防具有形成血块的倾向的患者的不期望的血栓形成的需要，所述患者例如具有凝血异常、限于不动时期或经历医学手术的那些患者。然而，抗凝血剂疗法的一种主要限制是与治疗有关的出血风险，和在过量用药的情况下或如果需要紧急手术程序，快速地逆转抗凝血剂活性的能力的限制。因此，极其需要针对所有形式的抗凝血剂疗法的具体且有效解毒剂。

当口服递送不切实际或需要立即治疗活性时，通过注射递送生物活性蛋白一般是所选递送途径。然而，如不良的长期存储、摩尔渗透压浓度、溶解度和稳定性的生物、化学和物理障碍使得通过注射至哺乳动物递送生物活性剂成问题。冻干可解决长期存储问题。然而，使用冻干也会出现问题，如冻干物的不良溶解度和稳定性。因此，需要针对抗凝血剂的解毒剂的改进的可注射制剂，其为稳定并且可溶性的。本公开满足这些和其它需要。

本文所提到的任何和所有出版物、专利、专利申请均由此以引用的方式整体并入。

概述

本公开提供Xa因子(fXa)蛋白衍生物(称作“r-解毒剂”)的冻干制剂。与野生型fXa蛋白相比，所述r-解毒剂具有Gla结构域的修饰和活性位点，保持fXa结合于fXa抑制剂的能力，但不会组装成凝血酶原酶复合物。所述r-解毒剂为两链多肽(参见表3中的SEQ IDNO.3，其包括轻链(SEQ ID NO.4)和重链(SEQ ID NO.5)，用在所述轻链的半胱氨酸98(Cys98)与所述重链的半胱氨酸108(Cys108)之间的单个二硫键连接。

也如同野生型fXa，所述r-解毒剂经历翻译后修饰，导致某些氨基酸残基的糖基化，例如所述轻链的Ser56、Ser72、Ser76和Thr82和所述重链的Thr249，和在所述轻链的Asp29处的经过修饰的残基(3R)-3-羟基Asp。此外，除了链间二硫键以外，在所述轻链的半胱氨酸16与27、21与36、38与47、55与66、62与75、和77与90之间，并且在所述重链的半胱氨酸7与12、27与43、156与170、和181与209之间还形成链内二硫键。

已知所述r-解毒剂的两链结构和多种翻译后修饰，本文中显示提供具有可接受的摩尔渗透压浓度的稳定并且可溶性溶液的稳定冻干制剂的开发提供了巨大挑战。然而，出乎意料地，本发明人能够得到平衡了蛋白溶解度、稳定性、饼结构和摩尔渗透压浓度的溶液。

在一个实施方案中，本公开提供一种水性制剂。在一个实施方案中，所述制剂包含10mM至55mM精氨酸或8mM至35mM柠檬酸盐、1％至3％蔗糖(w/v)、2％至8％甘露醇(w/v)和至少5mg/mL的两链多肽，所述两链多肽包括具有氨基酸序列SEQ ID NO.4的第一链、具有氨基酸序列SEQ ID NO.5的第二链和在SEQ ID NO.4的位置98处的第一半胱氨酸残基(Cys98)与在SEQ ID NO.5的位置108处的第二半胱氨酸残基(Cys108)之间的二硫键，其中所述制剂的pH为7.5至8。

在一些方面，所述制剂包含40mM至50mM精氨酸、1.5％至2.5％蔗糖(w/v)、4.5％至5.5％甘露醇(w/v)和至少10mg/mL的所述多肽。在一些方面，所述制剂包含10mM至30mM柠檬酸盐、1.5％至2.5％蔗糖(w/v)、4.5％至5.5％甘露醇(w/v)和至少10mg/mL的所述多肽。