[发明专利]用于制备树突状细胞的方法、由该方法制备的树突状细胞、及其应用

说明书

本发明涉及用于制备树突状细胞的方法、通过该方法制备的树突状细胞及其用途，更具体地涉及：用于制备树突状细胞的方法，包括在未成熟树突状细胞成熟步骤中用与能够穿透细胞膜的肽结合的抗原处理细胞以将其对该抗原致敏；通过所述方法制备的树突状细胞，及其免疫治疗剂；用于抗肿瘤疫苗的用途、或含有所述树突状细胞的用于治疗肿瘤的药物组合物。

技术领域

本发明涉及用于制备树突状细胞的方法、由其制备的树突状细胞及其用途，并且更具体地涉及：用于制备树突状细胞的方法，所述方法包括用与具有细胞膜通透性的肽结合的抗原处理在成熟期而非在未成熟期的树突状细胞以制备具有改善的抗原呈递能力的树突状细胞；通过所述方法制备的树突状细胞；及其免疫治疗剂、用于抗肿瘤疫苗的用途、或含有所述树突状细胞的用于治疗肿瘤的药物组合物。

背景技术

树突状细胞是专职抗原呈递细胞(APC)，在体内的免疫诱导和免疫调节中起重要作用。

人体中的树突状细胞仅占总白细胞的0.3％，但它们是能够激活从未接触过抗原的未免疫T细胞以诱导初级免疫应答，并能诱导抗原特异性获得性记忆免疫的免疫细胞。树突状细胞能够充当专职抗原呈递细胞的原因是在细胞表面上除了主要组织相容性复合物(MHC)I/II之外还高度表达共刺激分子，如CD80和CD86以及粘附分子，如ICAM-1，并且大量分泌与T细胞活化相关的各种细胞因子(干扰素，IL-12，IL-18等)。

如上所述，由于树突状细胞能够有效地诱导或调节抗原特异性T细胞活性，已经长时间研究了树突状细胞用作癌症或难治性免疫疾病的治疗剂的可能性。发现当用抗原致敏直接从组织或血液分离的树突状细胞或从单核细胞分化的树突状细胞并且将成熟的树突状细胞注射回身体中时，它诱导专门的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，因此，已经长时间研究了开发树突状细胞作为用于治疗癌症或感染性疾病的疫苗的可能性(Inaba,K.etal.,3.Exp.Med.,178:479,1993；Inaba,K.et al.,Int.Rev.Immunol.,6:197,1990；Hsu,F.et al.,Nature Med.,2:52,1996)。

基于这些早期研究结果，已经在全世界积极地进行树突状细胞疗法用于癌症治疗的临床研究，并且已经在各种癌症中报告了结果。然而，用单一治疗的临床效果小于初始的预期。

树突状细胞疗法尚未获得成功的已知原因是由于肿瘤细胞的低免疫原性和由癌细胞分泌的免疫抑制物质。在这种情况下，如果树突状细胞能够诱导更专门的抗癌免疫力以克服肿瘤细胞的低免疫原性并诱导能够超越肿瘤细胞的免疫抑制能力的抗癌免疫，则可以大大改善治疗效果。在这些情况下，本发明人发现，当用重组抗原致敏成熟期而非未成熟期的树突状细胞时，其中抗原与具有细胞膜通透性的功能肽，如胞质转导肽[CTP:Kim,D.etal.Exp Cell Res.312(8):1277-88,2006]结合，可以制备与常规树突状细胞相比具有明显改善的淋巴结迁移能力、T细胞增殖能力、细胞毒性T淋巴细胞诱导能力等的树突状细胞，并确认可以提供使用所述树突状细胞的免疫治疗剂和使用所述树突状细胞的用于预防或治疗肿瘤的药物组合物，从而完成了本发明。

发明内容

技术问题

本发明的一个目的是提供制备具有改善的细胞毒性T淋巴细胞诱导能力和改善的功能的树突状细胞的方法、通过该方法制备的树突状细胞、以及含有所述树突状细胞的用于治疗肿瘤的抗肿瘤疫苗或药物组合物。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供了制备树突状细胞的方法，包括用结合与具有细胞通透性的肽的抗原致敏用成熟因子处理和培养的树突状细胞。

本发明还提供通过该方法制备的树突状细胞。

本发明还提供含有树突状细胞的免疫治疗剂。

本发明还提供含有该树突状细胞的抗肿瘤疫苗。