[发明专利]包含非结构蛋白的片段的登革热病毒嵌合多表位及其用途

权利要求书

1.一种嵌合多肽，其由组装在融合多肽中的以下(a)、(b)和(c)的片段组成，其中所述(a)、(b)和(c)的片段以这个顺序直接融合：(a) 登革热病毒(DENV)血清型1 (DENV1)的非结构(NS) NS3蛋白的两个片段，其由两个区域组成，其中第一区域的氨基酸序列如SEQ IDNO: 6中定义，并且第二区域的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9中定义，(b) DENV1的NS4b蛋白的片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 12中定义，和(c) DENV1的NS5蛋白的片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 15中定义。

2.权利要求1的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽的氨基酸序列是SEQ ID NO: 3。

3.权利要求1的嵌合多肽，其引发针对DENV1、DENV2、DENV3和DENV4的人白细胞抗原(HLA)限制性CD8+和/或CD4+ T细胞应答。

4.分离或纯化的多核苷酸，其编码权利要求1的嵌合多肽。

5.权利要求4的多核苷酸，其中所述多核苷酸的核苷酸序列选自SEQ ID NO: 1或SEQID NO: 2。

6.载体，其是包含权利要求4的多核苷酸的质粒。

7.重组麻疹病毒(MV)基因组载体，其为包含以下的质粒：(i) 编码MV病毒的全长RNA基因组的cDNA以及(ii) 权利要求4的多核苷酸，所述多核苷酸作为插入物位于所述MV基因组的P和M基因之间或者所述MV基因组的H和L基因之间，其中当重组于所述质粒中时，(i)和(ii)的序列一起遵守六位规则。

8.权利要求7的重组MV基因组载体，其中(ii)的所述多核苷酸作为插入物在额外转录单元(ATU)中位于所述MV基因组的P和M基因之间或者所述MV基因组的H和L基因之间。

9.重组MV基因组载体，其为包含以下的质粒：(a) 编码MV病毒的全长RNA基因组的cDNA以及(b) 编码DENV抗原的多核苷酸，所述DENV抗原包含融合至DENV1的膜蛋白的胞外域(ectoM)的4种DENV血清型的包膜结构域III (EDIII)多肽的融合物，以及(c) 权利要求4的多核苷酸，其中：- 所述多核苷酸(b)作为插入物位于所述MV基因组的P和M基因之间，并且所述多核苷酸(c)作为插入物位于所述MV基因组的H和L基因之间，或者- 所述多核苷酸(b)作为插入物位于所述MV基因组的P和M基因之间，并且所述多核苷酸(c)作为插入物位于所述MV基因组的P和M基因之间，或者- 所述多核苷酸(b)作为插入物位于所述MV基因组的H和L基因之间，并且所述多核苷酸(c)作为插入物位于所述MV基因组的P和M基因之间，并且其中当重组于所述质粒中时，(a)、(b)和(c)的序列一起遵守六位规则。

10.权利要求9的重组MV基因组载体，其中所述DENV抗原的序列是SEQ ID NO: 145。

11.权利要求7或9的重组MV基因组载体，其包含编码减毒活Schwarz病毒或Moraten病毒的全长RNA基因组的cDNA。

12.用权利要求4的多核苷酸、权利要求6的载体或者权利要求7或9的重组MV基因组载体遗传转化的宿主细胞。

13.权利要求12的细胞，其为HEK-293-T7-MV细胞系。

14.重组麻疹病毒(MV)颗粒，其拯救自表达T7 RNA聚合酶以及MV的N、P和L蛋白的辅助细胞系，并且其进一步表达编码权利要求6的载体的核酸或编码权利要求7或9的重组MV基因组载体的核酸。