[发明专利]用于生物合成化合物的方法、试剂和细胞

权利要求书

1.在重组宿主中屏蔽用末端羧基基团官能化的碳链脂肪族主链的方法，所述方法包括：

使用具有脂肪酸O-甲基转移酶活性的多肽在所述宿主中将n-羧基-2-烯酸酶促转化成n-羧基-2-烯酸甲酯，其中n+1反映所述碳链脂肪族主链的长度。

2.权利要求1的方法，其中所述n-羧基-2-烯酸是2,3-脱氢己二酸。

3.权利要求1的方法，其中所述n-羧基-2-烯酸甲酯是2,3-脱氢己二酸甲酯，所述方法还包括将2,3-脱氢己二酸甲酯酶促转化成己二酰CoA。

4.权利要求3的方法，所述方法还包括将己二酰-CoA酶促转化成选自下组的产物：己二酸，6-氨基己酸，6-羟基己酸，己内酰胺，己二胺和1,6己二醇。

5.权利要求4的方法，其中使用一种或多种多肽将己二酰-CoA转化为所述产物：所述多肽具有硫酯酶，可逆性CoA连接酶，戊烯二酸CoA转移酶，ω-转氨酶，6-羟基己酸脱氢酶，5-羟基戊酸脱氢酶，4-羟基戊酸脱氢酶，醇脱氢酶，羧酸还原酶或醇脱氢酶活性。

6.在重组宿主中生成2,3-脱氢己二酰-CoA甲酯的方法，所述方法包括：

使用具有脂肪酸O-甲基转移酶活性的多肽将2,3-脱氢己二酸酶促转化为2,3-脱氢己二酸甲酯。

7.权利要求6的方法，所述方法还包括将2,3-脱氢己二酸甲酯酶促转化成己二酰-CoA甲酯。

8.权利要求6的方法，其中从2,3-脱氢己二酰-CoA酶促生成2,3-脱氢己二酸。

9.权利要求8的方法，其中具有硫酯酶或CoA转移酶活性的多肽将2,3-脱氢己二酰CoA酶促转化为2,3-脱氢己二酸。

10.权利要求9的方法，其中所述具有硫酯酶活性的多肽与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性。

11.权利要求9的方法，其中所述具有CoA转移酶活性的多肽与SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述具有脂肪酸O-甲基转移酶活性的多肽分类在EC2.1.1.15下。

13.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述具有脂肪酸O-甲基转移酶活性的多肽与SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性。

14.权利要求6的方法，其中使用EC 6.2.1.-下分类的具有CoA连接酶活性的多肽将2,3-脱氢己二酸甲酯酶促转化成2,3-脱氢己二酰-CoA甲酯。

15.权利要求14的方法，其中所述具有CoA连接酶活性的多肽分类在EC 6.2.1.2或EC 6.2.1.3下。

16.权利要求14或15的方法，所述方法还包括将2,3-脱氢己二酰-CoA甲酯酶促转化成己二酰-CoA甲酯。

17.权利要求16的方法，其中具有反式-2-烯酰基-CoA还原酶活性的多肽将2,3-脱氢己二酰-CoA甲酯酶促转化成己二酰-CoA甲酯。

18.权利要求16或权利要求17的方法，所述方法还包括将己二酰-CoA甲酯酶促转化成己二酰-CoA。

19.权利要求18的方法，其中具有庚二酰-[acp]甲酯酯酶(pimelyl-[acp]methyl ester esterase)活性的多肽将己二酰-CoA甲酯酶促转化成己二酰-CoA。

20.权利要求19的方法，其中所述具有庚二酰-[acp]甲酯酯酶活性的多肽与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有至少70％的序列同一性。

21.权利要求18至20中任一项所述的方法，所述方法还包括将己二酰-CoA酶促转化成选自下组的产物：己二酸，6-氨基己酸酯，6-羟基己酸酯，己内酰胺，六亚甲基二胺和1,6-己二醇。