[发明专利]灌注培养方法及其用途

权利要求书

1.一种培养哺乳动物细胞的方法，所述方法包括：

提供包含至少一个孔的多孔板，所述孔包含置于第一液体培养基中的哺乳动物细胞，其中所述第一液体培养基占据约5％至约70％的孔体积；

在约31℃至约40℃并以约320转每分钟(RPM)至约500RPM旋转搅拌，将所述多孔板温育一段时间；和

在所述时间段过程中，连续地或周期性地去除第一体积的第一液体培养基，并向所述第一液体培养基添加第二体积的第二液体培养基，其中所述第一和第二体积大致相等。

2.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述CHO细胞含有编码重组蛋白的核酸。

4.权利要求3的方法，其中所述重组蛋白是免疫球蛋白、酶、生长因子、蛋白片段或工程化蛋白。

5.一种产生重组蛋白的方法，该方法包括：

提供包含至少一个孔的多孔板，所述孔包含置于第一液体培养基中的哺乳动物细胞，其中所述第一液体培养基占据约5％至约70％的孔体积，并且所述哺乳动物细胞含有编码重组蛋白的核酸；

在约31℃至约40℃并以约320转每分钟(RPM)至约500RPM旋转搅拌，将所述多孔板温育一段时间；

在所述时间段过程中，连续地或周期性地去除第一体积的第一液体培养基并向所述第一液体培养基添加第二体积的第二液体培养基，其中所述第一和第二体积大致相等；和

从所述哺乳动物细胞或从所述第一或第二培养基回收所述重组蛋白。

6.权利要求5的方法，其中所述重组蛋白回收自所述哺乳动物细胞。

7.权利要求6的方法，其中所述重组蛋白是免疫球蛋白、酶、生长因子、蛋白片段或工程化蛋白。

8.权利要求5的方法，其中所述重组蛋白回收自所述第一或第二液体培养基。

9.权利要求8的方法，其中所述重组蛋白是分泌的免疫球蛋白、分泌的酶、分泌的生长因子、分泌的蛋白片段或分泌的工程化蛋白。

10.一种用于测试用于制备重组蛋白的制造工艺的方法，所述方法包括：

提供包含至少一个孔的多孔板，所述孔包含置于第一液体培养基中的哺乳动物细胞，其中所述第一液体培养基占据约5％至约70％的孔体积，并且所述哺乳动物细胞含有编码重组蛋白的核酸；

在约31℃至约40℃并伴随约320转每分钟(RPM)至约500RPM旋转搅拌，将所述多孔板温育一段时间；

在所述时间段过程中，连续地或周期性地去除第一体积的第一液体培养基并向所述第一液体培养基添加第二体积的第二液体培养基，其中所述第一和第二体积大致相等；

检测所述哺乳动物细胞中或所述第一或第二液体培养基中的重组蛋白；和

将所述哺乳动物细胞中或所述第一或第二液体培养基中存在的重组蛋白的量与重组蛋白的参考水平进行比较。

11.权利要求10的方法，其中所述重组蛋白的参考水平是使用不同的培养方法产生的重组蛋白的水平。

12.权利要求11的方法，其中所述不同的培养方法利用不同的第一或第二液体培养基、不同的哺乳动物细胞、不同的温度、不同的搅拌水平或不同的多孔板。

13.权利要求11的方法，其中所述不同的培养方法利用不同的原材料、抗结块剂或化学上限定的液体培养基。

14.权利要求10的方法，其中所述方法用于实施高通量细胞培养实验来执行实验设计(design-of-experiment；DOE)或质量源于设计(quality-by-design；QBD)研究。

15.权利要求10的方法，其中在所述第一或第二液体培养基中检测所述重组蛋白。

16.权利要求15的方法，其中所述重组蛋白是分泌的免疫球蛋白、分泌的酶、分泌的生长因子、分泌的蛋白片段或分泌的工程化蛋白。

17.权利要求10的方法，其中在所述细胞中检测所述重组蛋白。

18.权利要求17的方法，其中所述重组蛋白是免疫球蛋白、酶、生长因子、蛋白片段或工程化蛋白。