[发明专利]双特异性四价抗体及其制造和使用方法

权利要求书

1.一种双特异性四价抗体，所述双特异性四价抗体包含：

两条IgGl重链；

两条κ轻链；以及

两个单链Fv(scFv)结构域；

其中所述两条IgGl重链和κ轻链形成对EGFR家族的第一成员具有结合特异性的IgG部分；

其中所述两个scFv结构域对EGFR家族的第二成员具有结合特异性，且每个scFv结构域通过为(gly-gly-gly-gly-ser)_n的氨基酸序列的连接体连接到所述IgGl重链中任一个的C-端，以提供IgGl-连接体连接，其中n是至少1的整数；以及

其中每个单链Fv结构域为N端-重链可变区-接头-轻链可变区-C端或N-端-轻链可变区-接头-重链可变区-C-端的结构顺序，其中所述接头由(gly-gly-gly-gly-ser)_m的氨基酸序列组成，其中m是至少3的整数，

其中所述IgGl重链中至少一个是人源化或人IgGl重链，

其中所述IgG部分具有对EGFR的结合特异性，并且所述单链Fv结构域具有对HER3的结合特异性；其中所述IgGl重链、连接体和单链Fv结构域为SEQ ID NO 136的氨基酸序列，并且所述κ轻链为SEQ ID NO 131的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体，其中所述抗体抑制癌细胞生长。

3.根据权利要求1所述的双特异性四价抗体，其中所述抗体以小于50nM的解离常数(Kd)结合至EGFR和HER3。

4.编码根据权利要求1所述的双特异性四价抗体的核酸，包含编码SEQ ID NO 132所述轻链可变区氨基酸序列的分离的核酸或包含编码SEQ ID NO 137所述的重链可变区氨基酸序列的分离的核酸。

5.一种表达载体，其包含根据权利要求4所述的分离的核酸。

6.根据权利要求5所述的表达载体，其中所述载体可在细胞中表达。

7.一种宿主细胞，其包含根据权利要求4所述的核酸。

8.一种宿主细胞，其包含根据权利要求5或6所述的表达载体。

9.根据权利要求8所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞或真核细胞。

10.一种包含根据权利要求1所述的双特异性四价抗体和细胞毒性剂的免疫偶联物。

11.一种包含根据权利要求1所述的双特异性四价抗体和药学上可接受的载剂的药物组合物。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其进一步包含放射性同位素、毒素、治疗剂或其组合。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述放射性同位素是放射性核素。

14.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述治疗剂是化学治疗剂。

15.一种药物组合物，其包含根据权利要求10所述的免疫偶联物和药学上可接受的载剂。

16.有效量的根据权利要求1所述的双特异性四价抗体在制备治疗受试者癌症的药物中的用途，其中所述癌症包含表达EGFR和HER3的细胞。

17.根据权利要求16所述的用途，其中所述癌症包含乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、食管癌、鼻咽癌、肛门癌、直肠癌、胃癌、膀胱癌、子宫颈癌和脑癌。