[发明专利]包含N‑乙酰半胱氨酸的细胞培养方法和培养基

说明书

对以电子方式提交的序列表的引用

与本申请一起提交的ASCII文本文件的以电子方式提交的序列表内容(名称：IL13-310P1_SL.txt；大小：15,073字节；以及创建日期：2014年6月11日)通过引用以其整体结合在此。

背景

许多重要的基于蛋白质的生物治疗剂在细胞培养物中产生。这些治疗剂包括但不限于重组蛋白和抗体治疗剂。与传统的小分子治疗剂相比，在细胞培养物中产生生物治疗剂增加了制造商业产品和临床候选物的成本。重要的限制因素之一是在生产设施中由细胞冷冻贮存物放大生产运行所花费的时间，以及由用于生产重组蛋白和抗体治疗剂的细胞的相对缓慢生长所引起的高度设备占用率和利用率。因此，需要开发增加细胞活力和/或细胞生长率(引起细胞倍增时间减少)以减少生产放大的时间线、设备占用率或利用率并降低成本的优化的细胞培养方法和试剂。通常使用血清或其他动物蛋白成分增强细胞在实验室环境中生长的能力。然而，由于监管担忧或潜在安全性问题，细胞培养基和试剂在生产生物治疗剂时通常并不含有血清或其他动物蛋白成分。动物蛋白组分的去除使得细胞更难以在培养物中生长并且使得细胞更难以由冷冻贮存物解冻并开始生长，从而降低产物产率并增加设备占用率、利用率和成本。因此，准确地说当生产效率变得最重要时，细胞培养基成分受到了限制。因此，本领域面临着对用于产生基于蛋白质的生物治疗剂诸如异源蛋白和抗体治疗剂的细胞系的细胞培养成分进行优化的挑战。实际上，大量培养基组分的参与、细胞代谢途径的复杂性和各种培养基组分与复杂细胞途径之间的相依性通常使得优化细胞培养试剂或方法非常困难。在此背景下，在此提供了包含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的细胞培养基和细胞培养方法，该N-乙酰半胱氨酸当被添加到涉及胆固醇营养缺陷型细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞的细胞培养基中和/或被用于涉及这些细胞的细胞培养方法中时出人意料地增加了细胞活力、细胞生长率并减少了细胞倍增时间。

其他人已建议将N-乙酰半胱氨酸作为一般氨基酸来源(参见，例如EP 2351827；在低于在此所用的数量级的量下)或作为一般还原剂(参见，例如，EP1434856、WO2012095731、US20060258003)添加到细胞培养基中，以分别支持T细胞、神经元祖细胞/干细胞、或肌肉祖细胞/干细胞的生长。相比之下，在此提供了包含N-乙酰半胱氨酸的细胞培养基和细胞培养方法，这些细胞培养基和细胞培养方法增加胆固醇营养缺陷型细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞的细胞活力、细胞生长率并减少细胞倍增时间。如在此所述的(参见，例如实例1-6)，N-乙酰半胱氨酸当被添加到已含有氨基酸和还原剂的细胞培养基中时出人意料地增加了NSO细胞的细胞活力、细胞生长率并减少细胞倍增时间。

概述

说明书和权利要求书提供了包含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的各种细胞培养基和方法，其中下文提供了这些培养基和方法中的一些的概述。根据说明书，一个实施例提供了一种细胞培养方法，该方法包括：(a)提供一种足以支持细胞生长的细胞培养基，其中该细胞培养基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在该细胞培养基中培养细胞，其中该细胞是胆固醇营养缺陷型细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。在另一个实施例中，一种增加细胞活力的方法包括：(a)提供一种足以支持细胞生长的细胞培养基，其中该细胞培养基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在该细胞培养基中培养细胞，其中该细胞是胆固醇营养缺陷型细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。在另一个方面中，一种增加细胞生长率的方法包括：(a)提供一种足以支持细胞生长的细胞培养基，其中该细胞培养基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在该细胞培养基中培养细胞，其中该细胞是胆固醇营养缺陷型细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。在另一个实施例中，一种减少细胞倍增时间的方法包括：(a)提供一种足以支持细胞生长的细胞培养基，其中该细胞培养基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在该细胞培养基中培养细胞，其中该细胞是胆固醇营养缺陷型细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。于在此所披露的方法的一个实施例中，该细胞是胆固醇营养缺陷型细胞。于在此所披露的方法的另一个实施例中，该细胞是骨髓瘤细胞。于在此所披露的方法的另一个实施例中，该细胞是杂交瘤细胞。

在一个实施例中，这些细胞是由冷冻贮存物解冻的。在另一个实施例中，这些细胞处于扩增阶段。在另一个实施例中，该细胞培养基是无血清且无动物蛋白的培养基。在另一个实施例中，该细胞培养基是化学限定培养基。在另一个实施例中，该培养基包含脂质。