[发明专利]用于条形码化核酸的系统和方法

权利要求书

1.一种方法，其包括：

将多个细胞和多个颗粒包封在至少10,000个的多个微流体液滴内，至少一些颗粒包含共价键合到其上的寡核苷酸标签，以使得所述至少10,000个的多个液滴中的液滴含有一个或多个可与包含在所述多个液滴的其它液滴中的寡核苷酸标签区分的寡核苷酸标签；

裂解液滴内的至少一些细胞以从细胞释放核酸；

在至少一些液滴内键合释放的核酸和寡核苷酸标签；和

通过施加光从所述颗粒中释放至少一些所述寡核苷酸标签。

2.根据权利要求1所述的方法，其包括将所述多个细胞包封在所述多个微流体液滴中，以使得至少90％的所述微流体液滴含有一个细胞或不含细胞；和/或使得至少90％的所述微流体液滴含有一个颗粒或不含颗粒。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述颗粒以不超过1个颗粒/液滴被包封在所述液滴内。

4.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述颗粒以不超过0.1个颗粒/液滴被包封在所述液滴内。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述颗粒以不超过0.01个颗粒/液滴被包封在所述液滴内。

6.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述细胞以不超过1个细胞/液滴被包封在所述液滴内。

7.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述细胞以不超过0.1个细胞/液滴被包封在所述液滴内。

8.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述颗粒中的至少一些是水凝胶颗粒；和/或所述颗粒中的至少一些是聚合物颗粒；和/或所述颗粒中的至少一些是微粒；和/或所述颗粒中的至少一些包含聚丙烯酰胺；和/或所述颗粒中的至少一些包含琼脂糖；和/或所述颗粒中的至少一些包含聚苯乙烯；和/或所述颗粒中的至少一些包含聚-N-异丙基丙烯酰胺；和/或所述颗粒中的至少一些是磁性的；和/或所述多个颗粒具有不超过500微米的平均直径；和/或所述多个颗粒具有至少1微米的平均直径。

9.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸标签中的至少一些通过丙烯酸亚磷酰胺键与所述颗粒共价键合；和/或所述寡核苷酸标签中的至少一些通过氨基键与所述颗粒共价键合；和/或所述寡核苷酸标签中的至少一些通过生物素-链霉亲和素键与所述颗粒共价键合；和/或所述寡核苷酸标签从其它细胞释放的核酸中独特地鉴定所述释放的核酸；和/或所述寡核苷酸标签中的至少一些包含至少一个条形码序列。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述条形码序列选自条形码序列库。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述条形码序列库包括至少10,000个条形码序列。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述条形码序列库包括至少100,000个条形码序列。

13.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸标签中的至少一些包含至少两个条形码序列。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述至少两个条形码序列选自不同的条形码序列库。

15.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸标签中的至少一些包含引物序列。

16.根据权利要求15的方法，其中所述寡核苷酸标签中的至少一些包含多于一个引物序列。

17.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸标签中的至少一些包含可切割接头。