[发明专利]用于在产生岩藻糖基化低聚糖时使用的α(1，2)岩藻糖基转移酶变种

权利要求书

1.一种在细菌中存在乳糖时产生岩藻糖基低聚糖的方法，包括提供包括外源乳糖-利用性α(1,2)岩藻糖转移酶的细菌，其中所述α(1,2)岩藻糖转移酶包括氨基酸序列SEQ IDNO：17。

2.权利要求1所述的方法，其中，所述α(1,2)岩藻糖转移酶包括普雷沃菌FutW。

3.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中，进一步包括从所述细菌中或者所述细菌的培养物上清液中收集岩藻糖基化的低聚糖。

4.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中，所述岩藻糖基化的低聚糖包括2’-岩藻糖基乳糖(2’FL)。

5.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中，所述细菌进一步包括一种外源乳糖利用性α(1,3)岩藻糖转移酶和/或一种外源乳糖利用性α(1,4)岩藻糖转移酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述外源乳糖-利用性α(1,3)岩藻糖转移酶包括幽门螺杆菌26695futA基因。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述外源乳糖-利用性α(1,4)岩藻糖转移酶包括幽门螺杆菌UA948 FucTa基因或者幽门螺杆菌DMS6709 FucTIII基因。

8.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中，所述细菌进一步包括降低水平的β-半乳糖苷酶活性，有缺陷的柯拉酸合成途径，失活的ATP-依赖型细胞内蛋白酶、失活的lacA或其组合。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述方法进一步包括在色氨酸存在的情况下胸腺嘧啶不存在的情况下培养所述细菌。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述降低水平的β-半乳糖苷酶活性包括所述细菌缺失内源性lacZ基因或者使内源性lacZ基因失活和/或缺失内源性lacI基因或者使内源性lacI基因失活。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述降低水平的β-半乳糖苷酶活性进一步包括一种外源性lacZ基因或其变体，其中，所述外源性lacZ基因或其变体包括的β-半乳糖苷酶活性水平小于野生型细菌。

12.根据权利要求8所述的方法，其中所述降低水平的β-半乳糖苷酶活性包括的活性水平小于野生型细菌。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述降低水平的β-半乳糖苷酶活性包括小于6,000单位的β-半乳糖苷酶活性。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述降低水平的β-半乳糖苷酶活性包括小于1,000单位的β-半乳糖苷酶活性。

15.根据权利要求8所述的方法，其中所述细菌包括lacIq基因启动子，直接位于lacY基因的上游。

16.根据权利要求8所述的方法，其中所述有缺陷的柯拉酸合成途径包括所述细菌wcaJ基因的失活或删除所述wcaJ基因，其中与野生型细菌相比，所述细菌中编码的wcaJ的活性降低或消除。

17.根据权利要求8所述的方法，其中所述失活的ATP-依赖型细胞内蛋白酶是内源性lon基因的无效突变、失活突变或者删除。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述内源性lon基因的失活突变包括插入功能性大肠杆菌lacZ⁺基因。

19.根据权利要求8所述的方法，其中所述细菌进一步包括一种功能性乳糖渗透酶基因。