[发明专利]用于稳定化发光底物的组合物和方法

说明书

本文公开了用于稳定化发光底物诸如腔肠素或其功能性类似物的组合物和方法。所述功能性类似物可为furimazine。所述组合物可包含发光底物、硫代核苷和有机溶剂，其中所述硫代核苷以有效于稳定化所述发光底物以防止分解的量存在。本文所提供的方法通过使发光底物在有机溶剂存在下与有效量的硫代核苷接触来稳定化所述发光底物以防止分解。本文还提供了一种包含所述组合物的试剂盒。

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年5月23日提交的美国临时专利申请号62/002,363的优先权，所述申请的完整内容以引用的方式并入本文。

技术领域

本发明涉及用于稳定化发光底物的组合物和方法。

背景

发光常常在生物测定中用作报道分子活性的量度。所述报道分子因而将发光测量值与感兴趣的生物过程诸如转录(基因表达)、翻译(蛋白质表达)、蛋白质-蛋白质相互作用等等相连接，从而允许定量测定生物过程中发生的变化。

报道分子通常是一种发光酶(萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶、Oplophorus荧光素酶等)，所述酶当提供有其发光底物时引起光的产生，即发光。然而，发光底物可在保存期间分解，从而使得底物在加入或用于生物测定中之前有所损失。此分解可为发光底物在溶液中随着时间推移以温度依赖性方式不稳定的结果。此分解导致发光底物的浪费并且减少源自采用分解发光底物的生物测定的发光测量值的灵敏度和再现性。另外，来自此分解的产物常常抑制发光反应。

因此，需要鉴别并发展用于在发光底物用于发光反应之前使其稳定的新组合物和/或方法。

发明概要

本公开提供一种组合物，所述组合物包含：(a)发光底物；(b)有效量的式(I)化合物或其互变异构体，

其中

R¹为氢、烷基、取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、环烷基、芳基、杂芳基、羧酸、酯、NR^aR^b、亚胺、羟基或氧基；

R²为氢、NR^aR^b、亚胺、烷基或芳基；

R^a和R^b各自独立地为氢、烷基或芳基；以及

(c)有机溶剂。

本公开还提供了一种在单一容器中包含以上组合物的试剂盒，其中所述式(I)化合物或其互变异构体稳定化所述发光底物。

本公开还提供了一种稳定化发光底物的方法，所述方法包括使所述发光底物在有机溶剂存在下与有效量的式(I)化合物或其互变异构体接触，从而使所述发光底物稳定以防止分解，其中所述式(I)化合物为

其中

R¹为氢、烷基、取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、环烷基、芳基、杂芳基、羧酸、酯、NR^aR^b、亚胺、羟基或氧基；

R²为氢、NR^aR^b、亚胺、烷基或芳基；并且

R^a和R^b各自独立地为氢、烷基或芳基。

附图简述

图1示出腔肠素在ATT存在(A)和不存在(B)下的稳定性。

图2示出腔肠素-h在ATT存在(A)和不存在(B)下的稳定性。