[发明专利]用以制备虾红素的重组多核苷酸序列及其应用

权利要求书

1.一种用以制备虾红素、虾红素的前驱物或虾红素的衍生物的方法，包含：

(1)将重组多核苷酸序列引入宿主细胞；以及

(2)将该宿主细胞培养于培养液中，其中该培养液包含一种选自由葡萄糖、半乳糖、甘油和脂肪酸所组成的群组的成分；

其中，该重组多核苷酸序列包含：

第一基因组，其系包含第一启动子及可操作式地连结至该第一启动子的第一核酸序列，其中该第一核酸序列系用以编码焦磷酸香叶香叶酯合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase)；

第二基因组，其系包含第二启动子及可操作式地连结至该第二启动子的第二核酸序列，其中该第二核酸序列系用以编码3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl–coenzyme A reductase)；

第三基因组，其系包含第三启动子及可操作式地连结至该第三启动子的第三核酸序列，其中该第三核酸序列系用以编码一八氢茄红素去饱合酶(phytoene desaturase)；以及

第四基因组，其系包含第四启动子及可操作式地连结至该第四启动子的第四核酸序列，其中该第四核酸序列系用以编码具有八氢茄红素合成酶(phytoene synthase)和茄红素环化酶(lycopene cyclase)个别功能的双功能酶；

其中，该重组多核苷酸序列的各基因组的3’端与位于其下游的下一组基因组的5’端系为相互同源。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该培养液包含0.5-40％甘油。

3.根据权利要求1所述的方法，其中该培养液包含0.001％-5％脂肪酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其中该脂肪酸是辛酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其中该虾红素可以是3S、3S’-虾红素或3R、3R’-虾红素。

6.根据权利要求1所述的方法，其中该虾红素的前驱物可以是焦磷酸香叶香叶酯(geranylgeranyl-pyrophosphate)、尼基叶黄素(phenicoxanthin)、茄红素(lycopene)、海胆酮(echinenone)、斑螯黄质(canthaxanthin)、八氢西红柿红素(phytoene)、玉米黄质(zeaxanthin)、β-隐黄素(β-cryptoxanthin)或β-胡萝卜素(β-carotene)。

7.根据权利要求1所述的方法，其中该虾红素的衍生物可以是虾红素单酯体(monoester)或虾红素双酯体(diester)。

8.根据权利要求1所述的方法，其中该第一、第二、第三和第四核酸序列分别包含序列编号：1、2、3和4的序列。

9.根据权利要求1所述的方法，其中该重组多核苷酸序列进一步包含：

第五基因组，其系包含第五启动子及可操作式地连结至该第五启动子的第五核酸序列，其中该第五核酸序列系用以编码β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase)；以及

第六基因组，其系包含第六启动子及可操作式地连结至该第六启动子的第六核酸序列，其中该第六核酸序列系用以编码β-胡萝卜素酮醇酶(β-carotene ketolase)。

10.根据权利要求9所述的方法，其中该第五核酸序列包含序列编号：5、6或7的序列。

11.根据权利要求9所述的方法，其中该第六核酸序列包含序列编号：8的序列。

12.根据权利要求9所述的方法，其中该第一至第六启动子系分别选自由ScGapDH启动子、KlGapDH启动子、ScPGK启动子、KlPGK启动子、KlADHI启动子、ScADHI启动子、KlADH4启动子、ScADH4启动子、KlLac4启动子和ICL启动子所组成的群组。

13.根据权利要求12所述的方法，其中该第一至第六启动子系为不同的启动子。