[发明专利]抗病毒细胞及其用途

说明书

本发明提供了哺乳动物细胞系，所述哺乳动物细胞系已经经过了基因工程改造，从而致使这类细胞系对病毒进入和/或繁殖具有抗性；而且提供了一种使用所述细胞系来减少或防止生物生产系统的病毒污染的方法。

发明领域

本发明涉及经工程改造而具有抗病毒性的哺乳动物细胞系和所述细胞系用于减少或防止生物生产系统的病毒污染的用途。

背景

重组产生的治疗性蛋白质用于治疗许多疾病或病状(诸如癌症和自身免疫性疾病)的用途不断增加。然而，这些蛋白质治疗剂的大规模生产仍然是一个挑战。举例来说，工业制造过程中必须实现可靠高收率，使得下游工艺产生极纯的产物，只允许痕量污染物至优选地无污染物。

使用无动物成分的培养基已经显著地降低了外来病毒污染的发生率。另外，诸如超滤、高温短时间处理和/或对散装材料进行UVC照射之类的程序的实施进一步降低了污染的发生率。然而，病毒污染的风险仍然存在。就产品损失、暂时退出市场和昂贵的去污成本而言，污染事件对制造商将是灾难性的。因此，需要对病毒感染具有增加的抗性的哺乳动物细胞系。

附图简述

图1呈现了如通过Southern印迹分析所测定的MVM病毒感染的时间过程。利用在24、48、72和96小时针对野生型细胞(CHOZN GS-/-)、Slc35A1 KO、COSMC KO、COSMC KO克隆F07、COSMC KO克隆G03和COSMC KO克隆H05所检测的MVM病毒DNA的相对量进行作图。克隆H05具有12bp的框内缺失(即，无移码突变)。

图2示出了如通过空斑测定所检测的MVM病毒感染的时间过程。作图的是在24、48、72和96小时针对野生型细胞(CHOZN)、Slc.35A1 KO、COSMC KO、COSMC KO克隆F07、COSMC KO克隆G03和COSMC KO克隆H05所检测的pfu/mL。

图3示出了MMV感染对细胞生长的影响。作图的是野生型(2E3)(A)和COSMC KO克隆F07(B)细胞在MVM病毒不存在(实线)和以MOI 1或8存在(断线)的情况下在120小时过程中的活细胞数目(细胞/ml)。

图4呈现了MMV感染后的细胞相关病毒的时间过程。作图的是每个细胞的MVM病毒基因组拷贝数(vgc)(基于假定每一个已感染的细胞可以产生2x10⁴vgc)，如在MVM病毒以MOI 1(A)或8(B)存在的情况下通过qPCR在120小时的过程中针对野生型(2E3)(实现)和COSMC KO克隆F07(断线)细胞所检测。

图5示出了在指示的细胞系中的MMV复制的时间过程。作图的是用MVM病毒以MOI0.3(A)或0.03(B)感染后0和21小时的vgc/样品。

图6呈现了所指示的细胞系中的呼肠孤病毒3复制的时间过程。作图的是在感染Reo-3病毒后0和24小时与野生型细胞(2E3)相关的vgc/样品。.

图7呈现了在MVM病毒不存在(UN)或存在(IN)的情况下针对细胞生长进行的生长测定。图A呈现了野生型(GS)、Slc35A1 KO、COSMC KO克隆F07和COSMC KO克隆G03在10天内的活细胞密度(VCD)。图B呈现了野生型(GS)、来源于COSMC KO克隆F07的IgG产生克隆71H1和71C3在8天内的VCD。

图8呈现了在MVM病毒不存在(UN)或存在(IN)的情况下针对细胞生长进行的生长测定。作图的是野生型(GS)、St3Gal4 KO克隆7D10、St3Gal4 KO克隆1B08和St3Gal4 KO克隆1B10在9天内的VCD。

概要