[实用新型]一种生物素-亲和素系统快速检测卡

说明书

技术领域

本实用新型涉及体外诊断试剂领领域，特别涉及一种生物素-亲和素系统快速检 测卡。

背景技术

目前检测方法常用化学发光法、固相免疫层吸法、放射免疫分析法、免疫增强比浊 法、胶体金法。这些检测诸多方法中均存在不足，如酶联免疫法、固相免疫层吸法、放射免疫 分析法，操作繁琐、检测时间长、结果重复性差、核素污染，某些方法只能进行定性检测。化 学发光免疫分析法虽具有准确、灵敏度高、特异性强、精密度好的优点，但其所用仪器价格 昂贵，所用试剂又为进口试剂，一般实验室难以开展，并且不适用于急诊检验。

而在此基础上建立的生物素-亲和素系统(biotinavidinsystem，BAS)，是一种新 型生物反应放大系统，主要表现为灵敏度高、特异性强、稳定性好、适用性强等方面，被广泛 应用于医学各领域。亲和素（Avidin，AV）是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为 68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。亲和素的 等电点低、不含糖基、与生物素高特异性结合，在检测运用中有高灵敏度、低非特异性的结 合等优点，生物素易与蛋白质、核酸类生物大分子结合，形成生物素衍生物，再与SA结合，将 信号多级放大且大分子原有生物活性得到保持，使检测方法的灵敏度显著提高。SA与生物 素间具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，BSA系统的非特异性干扰低，且SA与生物素 的结合高速、高效，检测时间快。酸碱、有机溶剂、变性剂均不影响SA与生物素的结合力。SA 能够与绝大多数用于标记的物质结合，例如大分子物质：荧光蛋白、铁蛋白等。BAS系统可显 著提高标记免疫检测的灵敏度，在免疫学领域中应用广泛。

将生物素-亲和素系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技 术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床 快速诊断。链霉亲和素现已经广泛应用于时间分辨免疫荧光技术定量PCR、单链DNA制备、生 物大分子的纯化、单克隆抗体制备、生物芯片、肿瘤放射免疫诊断和治疗等领域，在生物技 术领域将不断得到新的应用，应用范围非常广泛、应用潜力极大。利用生物素-亲和素系统 研制检测快速诊断试剂尚无报道。

生物素-亲和素系统检测原理：BAS是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素与亲 和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。链霉亲和素（Streptavidin，SA）是链霉亲 和素菌在培养过程中的分泌产物，其生物学特性与亲和素（Avidin，AV）相似，与生物素结合 常数为10¹⁵/M，是抗原抗体反应（10⁵/M~10¹¹/M）的一万倍以上。生物素很易与蛋白质(如抗 体等)以共价键结合。这样，结合了荧光蛋白的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分 子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于荧光蛋白在聚合到一定程度时发出荧光，达到 检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白 质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此几乎所有用于标 记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种生物素-亲和素系统快速检测卡，本实用新型的检 测卡基于生物素-链霉亲和素放大系统、免疫层析技术和抗原抗体反应，具有灵敏度高、特 异性强、稳定性好、适用性强等优点，适用于临床快速诊断。

本实用新型的技术方案为：

一种生物素-亲和素系统快速检测卡，包括壳体6，所述壳体6上设有加样孔7和观察孔8；所述壳体6内设有检测试纸条，所述检测试纸条包括底板1以及依次设置在底板1上的样品垫2、含有链霉亲和素标记的荧光蛋白和生物素标记的抗人单克隆抗体的荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5；所述硝酸纤维素膜4上设有包被有抗人单克隆抗体的检测带T和包被有羊抗鼠IgG的质控带C；所述样品垫2、荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5依次搭接设置在底板1上；所述加样孔7与样品垫2对应设置，所述观察孔8与硝酸纤维素膜4对应设置。

其中，链霉亲和素标记的荧光蛋白中，荧光蛋白为藻胆蛋白、绿色荧光蛋白中的一种。另外，抗人单克隆抗体和抗人单克隆抗体具有不同的识别表位。

作为优选方案，所述样品垫2、荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5依次 搭接粘贴在底板1上。