[实用新型]检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物免疫检测技术领域，具体涉及一种检测大麻 醇的电化学纳米免疫传感器。

背景技术

大麻醇(Cannabinoid)是大麻(marijuana)中影响精神状态的主要成 分，它对大脑的作用主要是通过激活一个叫CB1的分子受体来实现 的。目前大麻醇主要用于其它药物疗效不佳的某些疾病，如神经系统 疾病中的多发性硬化症(MS)、运动性神经疾病、慢性顽固性疼痛和药 源性呕吐。另外，该药对青光眼、哮喘和心血管疾病也可能有一定作 用，虽然尚未进入临床应用，但已引起研究者的广泛兴趣。对大麻醇 的检测方法目前只能达到定性目的，如采用相应的试纸条/板/盒，灵 敏度为50ng/mL。为了便于对大麻醇进行研究和应用，亟需研究发展 检测灵敏度更高的检测方法。

实用新型内容

本实用新型的目的是针对目前无法对大麻醇进行定量检测、检测 灵敏度很低的缺陷，而提供一种检测大麻醇的电化学纳米免疫传感 器。本实用新型的电化学纳米免疫传感器不受样品的浊度、颜色的影 响，无需对样品进行纯化、富集等预处理，操作简单，检测灵敏度高、 特异性强，能够用于对大麻醇进行快速定量检测。

本实用新型提供下述技术方案解决上述技术问题。

本实用新型提供的技术方案之一是：一种检测大麻醇的电化学纳 米免疫传感器，所述传感器的电极表面是包住电极的壳聚糖凝胶层， 所述凝胶层之上为纳米金/辣根过氧化物酶层，所述纳米金/辣根过氧 化物酶层之上为抗大麻醇抗体层。

所述抗大麻醇的抗体为本领域常规，其来源和类型均没有特殊要 求，既可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，优选单克隆抗体， 更优选Balb/c小鼠单克隆抗体，且纯化后抗体的浓度不低于 0.5mg/mL。

所述电极可以是本领域常规所述的各类电极，优选玻碳电极。

所述检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器由包括如下步骤的制 备方法制备得到：

(1)对电极进行预处理，然后在电极上包被壳聚糖溶液；

(2)以壳聚糖为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶包被在电极 上；

(3)继续在电极上包被抗大麻醇抗体；

(4)封闭液封闭后即得。

步骤(1)为对电极进行预处理，然后在电极上包被壳聚糖溶液。

其中，所述电极可以是本领域常规所述的各类电极，优选玻碳 电极。

所述壳聚糖溶液优选以如下方法制得：将壳聚糖溶于醋酸溶液 得到壳聚糖溶液，备用。更优选地，将2g壳聚糖溶于100mL体积 百分比为2％的醋酸溶液中，搅拌3h得到2％的壳聚糖溶液，备用。

步骤(2)为以壳聚糖为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶包被 在电极上。

如本领域常规，所述包被为将电极置于溶液中进行包被。优选 地，所述包被为将电极置于由纳米金溶液和辣根过氧化物酶溶液组 成的混合溶液中进行包被。

所述纳米金溶液优选以如下方法制得：取0.01g/100mL氯金酸 溶液100mL，加入1g/100mL的柠檬酸钠溶液4mL混匀，置于微波 炉中低火保持8-10min，待自然冷却后用超纯水补充至104mL，即 得纳米金溶胶，置于4℃避光保存备用。

所述辣根过氧化物酶溶液优选以如下方法制得：将辣根过氧化 物酶(HRP)溶于磷酸缓冲液(PBS)中，即得辣根过氧化物酶溶液。 更优选地，将0.02g辣根过氧化物酶(HRP)溶于10mL0.01MpH 值为7.4的磷酸缓冲液(PBS)中，即得2.0g/L辣根过氧化物酶溶液。

所述封闭液为免疫检测领域常规的封闭液，优选牛血清白蛋白 (BSA)。

在所述包被的操作过程中，如本领域常规，一般都需要经过恒 温孵育和清洗的步骤。

在所述封闭的操作过程中，如本领域常规，一般也需要经过恒温 孵育和清洗的步骤。

本实用新型的电化学纳米免疫传感器利用循环伏安法、交流阻 抗法，原子力显微镜等表征电极组装的各个阶段。利用电流时间曲 线法等方法可以实现对复杂样品中大麻醇的定量检测，实验结果表 明该传感器灵敏度、特异性、稳定性、重现性以及使用寿命等技术 参数均良好。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即 得本实用新型各较佳实例。

本实用新型所用试剂和原料均市售可得。