[实用新型]一种用于检测乳腺癌细胞的染色试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物检测技术领域，具体地涉及一种用于检测乳腺癌细胞的染色试剂盒。

背景技术

乳腺癌患者远期生存的评价指标，包括原发灶的大小、腋窝淋巴结有无转移、肿瘤分子分型、以及是否有远处转移的证据等，这些指标对于患者群体的生存评价非常有意义，但对某些个体患者的风险判断的准确性相对有限。此外，在乳腺癌的随访期是通过体格检查、影像学等检查进行定期体检，等这些检查发现问题的时候其实已经错过了治疗的最佳时机。在乳腺癌的早期阶段，就有相当部分患者有微转移病灶(无法被常规医学检查发现的微小转移病灶)。既往研究发现微转移检测能够较目前随访检查手段更早反映患者远处转移的情况，而且微转移阳性患者较阴性患者预后更差。1979年，Heyderman通过免疫细胞化学(Immunocytochemistry，ICC)的方法检测到正常乳腺腺泡管腔膜上、乳腺癌细胞的细胞膜上和胞浆内广泛存在EMA(EpithelialMembraneAntigen)的表达。随后，Sloane入组了43位出现远处转移的乳腺癌患者，从髂嵴收集骨髓标本加入EMA的抗体，通过ICC的方法首次发现有8位患者的骨髓标本中存在转移的单个肿瘤细胞和少量肿瘤细胞团。这些肿瘤细胞从原发灶脱离之后，通过淋巴和/或血液循环播散至远处靶器官，潜伏在靶器官中，进入休眠状态，形成微转移细胞/微转移灶。当机体内环境改变或在某些外界因素的作用下，这些休眠的微转移细胞开始重新增殖，最终形成临床检查可以发现的复发和转移病灶。目前，临床上通常将存在于血液系统的微转移细胞称为循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCell，CTC)；定植于骨髓组织(BoneMarrow，BM)的则命名为播散肿瘤细胞(DisseminatedTumorCell，DTC)。

如能提供一种简单的方法检测骨髓标本或血液标本中是否有乳腺癌微转移细胞，对于乳腺癌的预后判断和个体化治疗具有重要意义。

实用新型内容

实用新型目的：为解决现有技术中存在的问题，本实用新型提供一种操作简便、准确性好的用于检测乳腺癌细胞的染色试剂盒。

技术方案：为实现上述技术目的，本实用新型的用于检测乳腺癌细胞的染色试剂盒包括盒体、盒盖、载玻片、装有小鼠抗人广谱细胞角蛋白抗体的一抗试剂瓶、装有辣根过氧化物酶标记兔抗鼠抗体的二抗试剂瓶、DAB显色试剂组、DAB显色液储瓶、装有苏木素的复染液试剂瓶、装有1％盐酸乙醇的分色液试剂瓶、装有中性树胶的封片液试剂瓶，其中，所述的盒体包括上下两层，其中，下层被分隔为两个空腔，两个空腔内分别设置有可抽拉的抽屉，其中，所述的载玻片设置于其中一个空腔内，所述的DAB显色试剂组设置于另一个空腔内；所述的DAB显色试剂组包括装有DAB缓冲液的试剂瓶、装有DAB底物的试剂瓶和装有DAB色原的试剂瓶；所述盒体的上层被分隔成六个分区，分别用于放置一抗试剂瓶、二抗试剂瓶、DAB显色液储瓶、复染液试剂瓶、分色液试剂瓶和封片液试剂瓶。

优选地，所述的DAB显色液储瓶为棕色储瓶。

优选地，所述的可抽拉的抽屉外侧设置有拉环。

使用方法：

(1)制备表面平铺细胞的载玻片面；

(2)以小鼠抗人广谱细胞角蛋白抗体(小鼠抗人Anti-panCytokeratinantibody[AE1/AE3])为一抗，将其与步骤(1)得到的平铺细胞的载玻片于37℃温箱中孵育1～2h，PBS洗涤3～4次，每次3～4min；

(3)以辣根过氧化物酶标记(HRPPolymerConjugate)兔抗鼠抗体为二抗，将步骤(2)得到的载玻片与所述二抗于常温下孵育25～30min，PBS洗涤3～4遍，每次3～4min；

(4)向步骤(3)得到的载玻片上滴加新鲜配制的DAB棕色显色液，室温下静置5～8min，待在低倍镜(10×)下视野内细胞呈现棕色染色后用水洗涤终止反应；

(5)用苏木素复染步骤(4)得到的载玻片30～40s，用自来水洗涤至水清澈后，用1％盐酸乙醇分色1s，然后水浸洗1～1.5min，依次浸入85％(v/v)乙醇、95％(v/v)乙醇、无水酒精中各3～4min，最后浸没到二甲苯中5～6min，从二甲苯中取出载玻片后风干，在载玻片半干时，滴加中性树胶封片液，封片保存，然后置于显微镜下观察。

其中，表面平铺乳腺癌细胞的载玻片的制备方法如下：

1)胰酶消化体外培养的乳腺癌细胞株，PBS溶液洗涤和混匀。