[实用新型]一种纯化小鼠IgM类单克隆抗体的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及生物大分子分离领域，具体地是从小鼠腹水中纯化IgM类单克隆抗体。

背景技术

与IgG类单克隆抗体不同，小鼠IgM类单克隆抗体不能与蛋白A或蛋白G结合，因此不能像IgG类单克隆抗体那样通过蛋白A或蛋白G进行亲和纯化。通常可以采用嗜硫法对小鼠IgM类单克隆抗体进行纯化，其原理是：在铵离子的存在下，小鼠IgM类单克隆抗体带大量负电，可以与嗜硫填料(固定化的β-巯基吡啶)进行结合，当去除铵离子时由于小鼠IgM类单克隆抗体呈电中性而从填料上脱落，从而得到具有天然活性的高纯度抗体。然而整个流程周期较长，并且所需的试剂配置复杂，市场上尚无此类试剂盒，因此给抗体纯化工作人员带来不便。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种试剂盒，含有纯化小鼠IgM类单克隆抗体的全部试剂和工具。

一种纯化小鼠IgM类单克隆抗体的试剂盒，包括盒体(1)和固定于泡沫塑料模具(2)上的4瓶液体试剂，1个嗜硫层析柱(7)，和1份说明书组成，4瓶液体试剂分别为2倍浓缩结合缓冲液(3)、纯水(4)、洗脱液(5)、考马斯亮蓝显色剂(6)。2倍浓缩结合缓冲液(3)一瓶60ml用带盖白色PE塑料瓶装，纯水(4)一瓶40ml用带盖白色PE塑料瓶装，洗脱液(5)一瓶20ml用带盖白色PE塑料瓶装，考马斯亮蓝显色剂(6)一瓶5ml用带盖棕色PE塑料瓶装。

嗜硫层析柱(7)是由3ml嗜硫纯化填料和10ml结合缓冲液工作液组成，放于泡沫塑料模具(2)中。所述的泡沫塑料模具(2)，位于盒体(1)内，它包含凹位一(8)，凹位二(9)，凹位三(10)，凹位四(11)，凹位五(12)这5个凹位，其中凹位一(8)放置2倍浓缩结合缓冲液，凹位二(9)放置纯水(4)，凹位三(10)放置洗脱液(5)，凹位四(11)放置考马斯亮蓝显色剂(6)，凹位五(12)放置嗜硫层析柱(7)。

本实用新型的优点在于：它包含小鼠IgM类的单克隆抗体纯化所需的全部试剂组分，使用时操作简单，纯化得到的小鼠IgM类单克隆抗体纯度高，活性损失小，回收率高，在科研和工业上进行中小规模纯化小鼠IgM类单克隆抗体有很大的应用价值。

附图说明

图1为本实用新型盒体(1)与固定泡沫模具(2)侧视图。

具体实施方式

一、试剂的配置与试剂盒的组装

1.2倍浓缩结合缓冲液的配制与装瓶：准确称量1.52gNa3PO4·12H2O、21.12g(NH4)2SO4，加纯水至95ml，搅拌使其完全溶解，调节pH至7.5，加纯水定容至100ml即为2倍浓缩结合缓冲液，取50ml盛装在白色塑料瓶中并拧紧瓶盖。另取10ml2倍浓缩结合缓冲液，加入10ml纯水，得到结合缓冲液工作液。

2.洗脱液的配制与装瓶：准确称量0.18gNaCl、0.00288gKH2PO4和0.04gNa2HPO4·12H2O，加纯水至20ml，搅拌使其完全溶解并盛装在洗脱液中并拧紧瓶盖。

3.取一根商品化空层析柱，用纯水洗涤，加入3ml商品化嗜硫纯化填料(固定化的β-巯基吡啶)，弃去保护剂，再向柱内加入10ml结合缓冲液工作液，再打开层析柱下堵帽，弃去结合缓冲液，再盖上堵帽，重新加入10ml结合缓冲液工作液，盖上层析柱上盖即组成嗜硫层析柱。

4.取40ml纯水装在纯水中并拧紧瓶盖；取5ml商品化考马斯亮蓝显色剂装在棕色瓶中拧紧瓶盖。

5.将试剂放入对应的凹位，其中凹位一放置2倍浓缩结合缓冲液，凹位二放置纯水，凹位三放置洗脱液，凹位四放置考马斯亮蓝显色剂，凹位五放置嗜硫层析柱。

上述几步装瓶的试剂与层析柱放置在泡沫模具相应位置上，再将泡沫模具放入盒体，放入说明书，盖上盒盖。试剂盒组装完成。

二、试剂盒的使用

1.取确定好亚型为IgM的腹水2000g离心10min取上清计量体积，加入等体积的2倍浓缩结合缓冲液充分混合均匀。

2.取出40ml的2倍浓缩结合缓冲液，用试剂盒里的纯水配置成结合缓冲液工作液，洗涤装有填料的层析柱三次。每次用8-10ml。洗涤完毕后，将混好腹水装入层析柱内，做好标记，盖上层析柱上盖。4℃孵育过夜。

3.将腹水从层析柱里放出，即为流穿液，单独用干净瓶子装好，在瓶子上做好标记。

4.用结合缓冲液工作液洗涤层析柱三次去掉未结合的抗体及杂质。

5.待层析柱内液体放干后，加入洗脱液洗脱抗体，每次加入1ml，用1.5ml的EP管收集洗脱下的组份。