[实用新型]检测五种氨基糖苷类抗生素的同步检测卡

说明书

技术领域

本专利涉及一种生物工程技术领域的检测方法，利用免疫层析技术一次检测五种氨基糖苷类抗生素。

背景技术

近年来，由于畜牧业盲目滥用抗生素现象日益严重，造成畜产品中抗生素残留增加，影响人类食品安全，所以抗生素残留问题已经引起社会的高度重视。

动物性食品中氨基糖苷类抗生素残留的危害：1.对公共卫生和人体健康的危害。长期摄入氨基糖苷类抗生素严重超标的动物性食品可导致肾毒性和耳毒性，同时损害脑神经；2.引起过敏反应。氨基糖苷类抗生素具有抗原性，能刺激机体形成抗体，当被致敏人体再接受这些抗生素治疗时，该抗生素就会与抗体结合，生成抗原抗体复合物而发生过敏反应；3.病原菌耐药性增加。抗生素在畜产品中的残留可能使动物病原菌产生耐药性，耐药基因细菌之间传播，由此导致致病菌的耐药性增加而引起人类和动物感染性疾病的治疗失败；4.破坏人体胃肠道微生物菌群的动态平衡。如果长期食用有抗生素残留的畜产品，对人类胃肠道的正常菌群平衡产生不良影响：a.破坏肠道菌群的屏障作用。b.肠道细菌耐药性增加。c.肠道菌群代谢活性改变。d.肠道细菌数目和相对比例改变，部分敏感菌群受到抑制或杀死，条件性致病菌大量繁殖或体外病原菌侵入。

新霉素（NEO）、链霉素（SM）、庆大霉素（GM）、大观霉素（SPE）、卡那霉素（KAN）是几种兽药中常用的氨基糖苷类抗生素。2002年农业部组织修订了《动物性食品中兽药最高残留限量》，并予以发布，新霉素、链霉素、庆大霉素、大观霉素属于“附录2：已批准的动物性食品中最高残留限量规定”，卡那霉素被国际食品法典兽药残留委员会列入“有关需要评估及再评估兽药的优先名单”。目前氨基糖苷类抗生素检测的主要方法为微生物检测法、色谱分析法和免疫分析法。微生物检测法的主要原理是根据抗微生物药对特异微生物的抑制作用，来检测受检样品中残留的抗生素。微生物检测法测定时间长，特异性低，灵敏度低，操作复杂。色谱分析法需要专门的色谱仪进行检验，价格昂贵且检测时间较长。免疫分析法主要包括放射免疫分析（RIA）、酶联免疫分析法（ELISA）和免疫层析技术。免疫分析法普遍具有高灵敏度高特异性的优点，但各个方法又具有自己的特点。放射免疫分析样品回收率高，但易造成放射污染，不易操作，以及同位素半衰期短；酶联免疫分析法可以经行批量检测，但操作步骤较为繁琐，耗时较长；免疫层析技术和上述两种免疫分析方法一样具有高特异性高灵敏度的优点，同时简化了操作步骤，缩短检测时间，不会造成二次污染。

免疫层析技术是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术，其最大特点是具有高度选择性。待测物、抗体和标记物是免疫分析中的三个基本要素。它往往以条状纤维层析材料为固相，通过毛细管作用使样品溶液在层析条上涌动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的抗体发生高特异性和高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域（检测带），通过可目测的标记物（胶体金或胶体硒）而达到直观的实验现象，而游离的标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。

检测五种氨基糖苷类抗生素的同步检测卡在市场上尚未有商品化的产品，市场上已有的产品均为对氨基糖苷类抗生素中某一种抗生素进行单一检测，多进行重复性操作，增加工作量，浪费时间。

实用新型内容

本实用新型的目的是设计开发出一种高灵敏度、高特异性的检测氨基糖苷类抗生素的检测卡，能够同时检测新霉素、链霉素、庆大霉素、大观霉素和卡那霉素，简化检测过程，使得检测更简单、省时、高效。

本实用新型检测卡由卡壳和试纸条组成，其中卡壳分为卡底和卡盖，卡盖上有项目名称显示窗、结果显示窗和加样槽，加样槽只有一个，且下方用无纺布覆盖，加样槽能够覆盖每个待检测试纸条，试纸条由PVC板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、保护膜以及标签膜组成。

胶体金垫是用胶体金分别标记新霉素、链霉素、庆大霉素、大观霉素和卡那霉素单克隆抗体，冻干到玻璃纤维素膜上制成的。硝酸纤维素膜上分别包被上述五种氨基糖苷类抗生素半抗原-卵清蛋白偶联物，作为检测线，包被羊抗鼠抗体作为质控线。样品垫为处理过的无纺布，保护膜为1cm宽透明胶带，标签膜上印有检测项目名称英文缩写（新霉素NEO、链霉素SM、庆大霉素GM、大观霉素SPE、卡那霉素KAN）。每个卡壳中并列放入5种试纸条各一个，分别检测新霉素、链霉素、庆大霉素、大观霉素和卡那霉素。

为了方便使用，检测卡配有滴管，滴管上有取液刻度，方便使用者吸取以及快速滴加样本。

本实用新型的有益效果：