[实用新型]一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒及装置

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种甲胎蛋白异质体的分离检测试剂盒及装置，属于医疗器械及体外诊断领域。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界范围内第四位常见的恶性肿瘤，每年大约有250000名患者死于肝细胞癌，肝细胞癌的发病机制至今仍未清楚，其在临床上恶性度较高，死亡率在消化道恶性肿瘤中排第三位，所以早期发现、早期治疗是提高患者生存率的关键，而大多数患者就诊时已届中晚期，失去了最佳治疗时机，危险因素包括由乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒导致的慢性肝炎和肝硬化。要得到有效治疗，筛查和普查的临床效率依赖于早期诊断。HCC是肿瘤病因学中的重要类型，肝硬化、病毒性肝炎、化学致癌物及环境因素等所造成的慢性肝脏损害都可诱发HCC。HCC恶性度高，容易复发及转移，预后差，而且早期诊断较困难，易于延误最佳治疗期。

甲胎蛋白(alphafetoprotein，AFP)是一种糖蛋白，检测血液中的AFP含量是目前诊断肝癌最常见的手段。AFP在哺乳动物胚胎期由肝脏实质细胞和卵黄囊细胞合成，来源于内胚层的胃肠道粘膜细胞也可少量合成。正常情况下，AFP主要存在于胎儿循环中，随着胎儿发育成熟，AFP合成逐渐减少。出生时脐血中AFP浓度可达10～100mg/L，出生后一年降至正常成人水平。如果新生儿AFP明显升高提示新生儿肝炎、先天性胆道闭锁或有能分泌AFP的胚胎性恶性肿瘤。AFP作为早期肝癌诊断指标的缺点是在肝病和肝硬化疾病中也有相当的比例存在阳性结果，AFP轻度增高(20～200ng/m1)见于相当数量的慢性肝病患者，在肝硬化患者中11.7—44％AFP阳性。因此在分辨良性肝病和恶性肝肿瘤时，AFP作为早期肝癌筛查指标的价值大为降低。

AFP异质体许多糖链的结构尚未完全明了。目前认为,通常所说的AFP异质体实际是指与LCA结合的A FP-L3,1999年第四届全国肝癌学术会议将其列为原发性肝癌临床诊断标准的肝癌标记物之一。2011年中国肝癌诊疗规范将 AFP-L3列为肝癌诊断特异性指标；多年来，AFP-L3被公认为是比单纯的AFP甲胎蛋白更为特异的原发性肝癌指标。

AFP-L3是唯一由患者肝脏中癌细胞生成的蛋白。在加拿大和美国的一项多中心、前瞻性、双盲、长期临床试验中，对该检测方法进行了研究。结果显示AFP-L3％升高(15％以上)的患者，在接下来的21个月中，发生肝细胞癌的危险增加7倍之多。根据已有的肝细胞癌肿瘤学实践指南，这些患者肝细胞癌发生率极端增高。

AFP异质体检测的临床意义：

1)鉴别肝癌与良性肝病。原发性肝癌患者AFP常升高，但许多良性肝脏疾病也可有AFP升高，单凭AFP结果有时很难区分良、恶性病变。此时AFP异质体检测就具有良好的临床意义，尤其对于AFP在30～400ng/ml之间者具有较好的价值。Yozhiaki对361例肝硬化进行了前瞻性研究，在53例AFP在30ug/L以上的患者中，2年以后21例发展为肝癌，确诊肝癌时39％的患者AFP在400ug/L以下。对比研究开始时肝细胞肝癌(HCC)组与非HCC组AFP测定值，未发现差异有显著性，研究发现病变时AFP异质体的类型有所不同,对HCC诊断LCA阳性率87.12％假阳性率21.5％，ConA阳性率89.17％，假阳性率17.15％。目前的研究结果把AFP-L3含量大于15％作为肝癌的阳性指标。

2)肝癌术后的监测。肝癌切除术后，血清AFP含量随之下降，其下降速度取决于体内残留AFP量及半衰期，一般2月内转阴，转阴时AFP异质体随之消失。如果AFP明显下降但不转阴，异质体变化不明显，则提示手术不彻底，可能还存在边缘残留、血管癌栓、卫星结节或转移等。如果异质体下降至25％以下，AFP和异质体浓度相对恒定，则可能是患者有肝炎或肝硬化所致。

3)胚胎异常发育及胎儿先天性疾患。正常妊娠期母体血清中AFP与胚胎中AFP处于平衡状态，一旦胎儿畸形或胎盘屏障发生异常，可导致胎儿血清渗入羊水中或羊水渗入母体血清，造成母体羊水或血清AFP急剧升高。但仅仅测定AFP总量有一定的局限性。实验表明神经管缺损、无脑儿或脊柱裂等。儿童肝母细胞瘤、胆道闭锁、性腺肿瘤、恶性畸胎瘤等可有AFP和/或AFP异质体的阳性。

目前用于AFP异质体的检测方法有植物凝集素亲和层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、亲和印迹法、亲和交叉免疫电泳法，这些方法均可以直接分离出AFP-L3蛋白并且进行定量估算，依据最终检测方法可以分为：

考马斯亮兰法：电泳后的标本直接用考马斯亮兰染色,洗脱后观察峰带。方法简单，但干扰因素多，灵敏度约1000ug/L。