[发明专利]一种多价EZH2肿瘤相关抗原肽及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域。具体而言，本发明涉及多价EZH2肿瘤相关抗原肽。本发明 还涉及编码所述抗原肽的分离的核酸，包含所述核酸的构建体和载体，以及包含所述核酸 的宿主细胞。本发明还涉及所述抗原肽的制备方法和其在制备药物组合物或疫苗中的用 途。

背景技术

EZH2是多梳蛋白家族的重要成员，它与其它3个亚基(EED、SUZ12和RbAp46/48)一 道共同组成多梳蛋白抑制性复合体2(polycombrepressivecomplex2,PRC2)。作为PRC2 的核心亚基，EZH2具有组蛋白甲基转移酶活性，在维持细胞增殖、干细胞自我更新和调节细 胞周期中发挥重要作用，并通过与组蛋白去乙酰化酶(HDACs)和DNA甲基转移酶(DNMTs)协 同作用使抑癌基因表达沉默，由此促进肿瘤发生以及侵袭转移。人EZH2基因由20个外显子 和19个内含子构成，编码由746个氨基酸残基构成的蛋白分子(MargueronR等人，Nature, 469(7330):343-349(2011)；VireE等人，Nature,439(7078):871–874(2006))。近年来研究 发现，EZH2是一种肿瘤相关抗原，能作为肿瘤标志物在不同的肿瘤组织中高表达，且其表达 水平与肿瘤的恶性程度高度正相关，由此EZH2正在成为抗肿瘤免疫治疗的新靶点 (BenetatosL等人，CellMolLifeSci,71(2):257-269(2014)；ChangCJ等人，BrJ Cancer,106(2):243-247(2012)；CreaF等人，CritRevOncolHematol,83(2):184-193 (2012)；WanL等人，ClinTranslOncol,15(2):132-138(2013)；GoeBP等人，PlosOne,8 (8):e71670(2013)；Hajosi-KalcakoszS等人，Diagnpathol,7:86(2012))。已经在EZH2蛋 白一级结构中鉴定出多个可作为肿瘤相关抗原的肽段，包括Aa120-128，Aa165-174，Aa243- 245，Aa291-299，Aa666-674，Aa699-708，Aa735-742等。重要的是这些肿瘤相关抗原肽在体 内能诱导产生抗肿瘤抗体并激活特异性T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，提示EZH2在抗 肿瘤免疫治疗中的重要应用价值(OgataR等人，Prostate,60(4):273-281(2004)；Steele JC等人，BriJCancer,95(9):1202–1211(2006)；KomoharaY等人，JUrol,177(3):1157- 1162(2007)；ItohY等人，OncolRep,18(5):1231-1237(2007))。

由于短肽(如氨基酸序列长度在30aa以下)的原核表达通常存在表达量低，纯化困 难，免疫原性差等问题，为了获得高纯度EZH2肿瘤相关抗原肽，本发明选取4条已经鉴定的 EZH2肿瘤相关抗原肽(Aa120-128，Aa165-174，Aa291-299，Aa735-742)，利用基因重组技术 在原核表达系统中人工设计与合成了含有上述4种EZH2肿瘤抗原肽的小分子融合蛋白(称 之为多价EZH2肿瘤相关抗原肽)，其保留了EZH2的抗原特征，能在动物体内诱导特异性抗体 生成。

发明内容

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术 人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、生物化学、 免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发 明，下面提供相关术语的定义和解释。

根据本发明，术语“免疫原性(immunogenicity)”是指，能够刺激机体形成特异抗 体或致敏淋巴细胞的能力。其既指，抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分 化，最终产生免疫效应物质如抗体和致敏淋巴细胞的特性，也指抗原刺激机体后，机体免疫 系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫应答。免疫原性是抗原最重要的性质，一种 抗原能否成功地诱导宿主产生免疫应答取决于三方面的因素：抗原的性质、宿主的反应性 和免疫方式。

根据本发明，术语“免疫原性片段”是指这样的多肽片段，其至少部分地保留了所 源自的蛋白的免疫原性。