[发明专利]一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法

权利要求书

1.一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法，其特征是包括下述步骤：

(1)供试品溶液的制备:

取本品2g-5g，精密称定，精密加取30％-100％甲醇25-30ml，称定重量，用超声处理30-60分钟取出，待溶液冷却至室温，用30％-100％甲醇补重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

(2)参照物溶液的制备：分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量，加50％甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液，使用时精密量取2.00mL，置25mL量瓶中，用30％-100％甲醇稀释至刻度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱为4.6mm×250mm，5μm，流动相乙腈-水，其中，乙腈为9％-55％梯度洗脱；体积流量0.8mL/min；DAD检测器，波长为253nm；柱温35℃；进样量10μL，理论板数均不低于10000；梯度洗脱表：其中A为乙腈，B为0.1％磷酸溶液，0～30分钟；A:9％～15％，B:91％～85％，30～45分钟；A:15％～25％，B:85％～75％，45～55分钟；A:25％～70％,，B:75％～30％，55～60分钟；A:70％～55％,B:30％～45％，60～65分钟；A:55％～9％,B:45％～91％，65～75分钟；A:9％～9％，B:91％～91％；

(4)测定：分别精密吸取步骤(1)和步骤(2)各10μl注入液相色谱仪，照步骤(3)测定，得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。

2.根据权利要求1所述一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法，其特征是：

(1)供试品溶液的制备:取本品2g，精密称定，精密加取50％甲醇25ml，称定重量，用超声处理30分钟取出，待溶液冷却至室温，用50％甲醇补重，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；

(2)参照物溶液的制备：分别精密称取绿原酸、连翘酯苷B、甘草苷、木犀草苷、连翘苷、黄芩苷、甘草酸7个参照物适量，加50％甲醇制成每1mL分别含绿原酸35.50μg、连翘酯苷B50.10μg、甘草苷42.50μg、木犀草苷39.45μg、连翘苷31.80μg、甘草酸42.65μg、黄芩苷40.00μg的混合参照物贮备溶液及单独参照物，使用时精密量取2.00mL，置25mL量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，作为参照物溶液；

(3)色谱条件：采用ZORBAXSB-C18色谱柱4.6mm×250mm，5μm，流动相梯度洗脱程序见表1；体积流量0.8mL/min；DAD检测器，波长为253nm；柱温35℃；进样量10μL，理论板数均不低于10000；梯度洗脱表：其中A为乙腈，B为0.1％磷酸溶液，0～30分钟；A:9％～15％，B:91％～85％，30～45分钟；A:15％～25％，B:85％～75％，45～55分钟；A:25％～70％,，B:75％～30％，55～60分钟；A:70％～55％,B:30％～45％，60～65分钟；A:55％～9％,B:45％～91％，65～75分钟；A:9％～9％，B:91％～91％；

(4)测定：分别精密吸取步骤(1)和步骤(2)各10μl注入液相色谱仪，照步骤(3)测定，得到一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱。

3.一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，按照权利要求1～2任一项所述的方法构建11批一种治疗风寒感冒中药的HPLC特征图谱，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件生成由7个共有峰构成的标准特征图谱，1-7号分别为绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷B、连翘苷、甘草酸、甘草苷、黄芩苷。

4.根据权利要求1或2所述的一种治疗风热感冒中药的HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，以甘草苷为参照峰S，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在第一规定值的±5％之内，所述第一规定值为：16.18-峰1、8.3-峰2、17.8-峰3、7.86-峰4、21.12-峰5、1.00-峰S、11.83-峰7。