[发明专利]一种造礁石珊瑚总RNA提取方法

权利要求书

1.一种造礁石珊瑚总RNA提取方法，包括造礁石珊瑚的采集和预处理、用裂解液裂解造礁石珊瑚释放出RNA、添加氯仿沉降再取水相，然后在水相中加入异丙醇沉淀RNA，弃上清，在余下溶液中加入乙醇沉淀RNA，得到造礁石珊瑚总RNA，其特征在于，

所述的造礁石珊瑚的采集和预处理是用无菌海水将造礁石珊瑚冲洗干净并将其表面的水吸干，然后在液氮中磨成粉末，得到造礁石珊瑚粉末；

所述的用裂解液裂解造礁石珊瑚释放出RNA是将造礁石珊瑚粉末用异硫氰酸胍裂解液裂解释放出RNA；所述的异硫氰酸胍裂解液含有体积分数为38％的酸性水饱和酚、0.8M硫

氰酸胍、0.4M硫代氰酸氨、0.1M乙酸钠和体积分数为5％的甘油，其余为无RNA酶的水。

2.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，其具体步骤为：

a、用无菌海水将造礁石珊瑚冲洗干净并将其表面的水吸干，在液氮中磨成粉末，得到造礁石珊瑚粉末；

b、将造礁石珊瑚粉末用异硫氰酸胍裂解液裂解，振荡混合，室温放置5min，4℃、12000g离心5min，取上清液；所述的异硫氰酸胍裂解液含有体积分数为38％的酸性水饱和酚、0.8M硫氰酸胍、0.4M硫代氰酸氨、0.1M乙酸钠和体积分数为5％的甘油，其余为RNase-free水；

c、按步骤b的上清液与氯仿体积比为5:1的量在步骤b的上清液中加入氯仿，摇荡混合，室温放置5min，4℃、12000g离心15-20min；离心后溶液分3层，取出上层水相，按取出的水相与异丙醇的体积比为2:1的量加入异丙醇，室温沉淀10min后12000g离心10min；弃上清，加入余下溶液等体积的无水乙醇，混匀，4℃、7500g离心5min；弃上清，干燥5-10min，得到造礁石珊瑚总RNA，将该RNA溶于RNase-freewater中-70～-80℃保存。

3.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，所述的造礁石珊瑚为鹿角杯形珊瑚、丛生盔形珊瑚、霜鹿角珊瑚或澄黄滨珊瑚。

4.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，所述的步骤a的无菌海水是经高温灭菌且经0.22μ微孔滤膜过滤的海水。

5.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，所述的步骤b的造礁石珊瑚粉末与异硫氰酸胍裂解液用量比为3g:1ml。

6.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，所述的步骤b和c的振荡混合为剧烈振荡15s。

7.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，还包括以下步骤：在步骤c的按步骤b的上清液与氯仿体积比为5:1的量在步骤b的上清液中加入氯仿，摇荡混合，室温放置5min，4℃、12000g离心15-20min后，再重复该操作2-3次。

8.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，所述的用于RNA提取的造礁石珊瑚使用前在低于-80℃环境下超低温保存。

9.根据权利要求1所述的造礁石珊瑚总RNA提取方法，其特征在于，所述的用于RNA提取的造礁石珊瑚使用前用干冰或液氮保存。