[发明专利]一种流感病毒抗体、其制备方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种流感病毒抗体，所述流感病毒抗体的轻链可变区具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；所述流感病毒抗体的重链可变区具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明所述抗体能够很好的中和H3N2、H4N6和H14N5亚型的流感病毒，该抗体能结合group 2中的所有亚型的流感病毒的HA蛋白；且所述抗体能够中和H3‑subclade的病毒，抑制H3亚型流感病毒在小鼠体内的复制；所述抗体具有重要的经济和社会意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种流感病毒抗体、其制备方法及应用。

背景技术

流感病毒(influenza virus)是引起流行性感冒的人畜共患传染病病原，属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，流感病毒属。按照流感病毒核蛋白和基质蛋白抗原性的不同，流感病毒可分为A、B、C三型。A型流感抗原性变化最频繁，普遍存在于人类和禽类中，带来的危害最大。A型流感根据病毒颗粒表面血凝素蛋白(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)的不同可分为多个亚型，目前已发现的HA有18个亚型(H1-H18)，NA有11个亚型。18个HA亚型又可进一步划分为group 1和group 2两个组别。

世界上每年都有流感的流行和爆发，给人类的生命安全及经济财产造成巨大的损失。历史上有四次大流感，均是由A型流感病毒引起的。这些大流感造成世界大约30万至5千万的死亡。近年来，仍然不断的有新型流感病毒出现，如2013年的H7N9禽流感跨种传播，由禽到人，到2015年1月，总感染571例，死亡人数达到212人，死亡率达到37.1％。

目前流感的抗病毒治疗药物主要有离子通道抑制剂和神经氨酸酶抑制剂两类。离子通道抑制剂包括金刚烷胺和金刚乙胺及其衍生物。这些药物以A型流感病毒的离子通道蛋白M2为靶标，通过阻断质子的内流，以及阻碍病毒粒子的脱衣壳和基因组释放入细胞质的过程来起到抗流感作用。但是，长期使用金刚胺类药物会出现胃肠道和中枢神经系统的副作用，并且金刚烷胺和金刚乙胺 在临床上使用了很长的时间，已出现了非常多的毒力和传播性能均未减弱的耐药毒株。神经氨酸酶抑制剂是以流感病毒的神经氨酸酶NA为靶标，针对病毒粒子释放过程的抗病毒药物。市场上已有治疗流感的神经氨酸酶抑制剂包括扎那米韦和奥司他韦，对感染流感早期病人提供较好的治疗效果。然而治疗后的病人容易对神经氨酸酶抑制剂产生耐药性，有些病人在没有使用治疗的情况下也会对其产生耐药性。

HA是流感表面的保护性抗原，针对HA抗体的研究由来已久。抗体的筛选技术目前有很多种，筛选出来的抗体根据结合在HA的近膜区和远膜区的不同，可以分为两种，一种是结合在HA头部远膜区的抗体，抑制了HA结合细胞表面的唾液酸连接的受体，从而抑制了病毒通过内吞的方式进入细胞。一种是结合在HA近膜区的抗体，有效的抑制了HA蛋白的膜融合活性。

HA头部区的抗体分为两种，一种是结合在受体结合位点的抗体，另一种是结合在受体结合位点旁边不同于受体结合位点的区域，如2015年最新研究出来的能够中和H5亚型流感病毒的抗体H5.3和FLD194。H5.3主要通过所有的CDR区结合H5的受体结合位点及周边区域，而FLD194主要通过5个CDR区结合在受体结合位点旁边不同于受体结合位点，它主要是通过抗体IgG形式的Fc区域的位阻作用阻碍了受体识别。

HA茎部区相对于头部区更为保守，针对HA茎部区的抗体一般为广谱中和抗体，能够中和多个的亚型的HA。所以针对该区域抗体的研究更受青睐。目前已经筛选出多种针对HA茎部区的广谱中和抗体。如筛选出的小鼠单克隆抗体C179可中和group1的A型流感病毒，人源抗体CR8020可中和group2的A型流感病毒，人源抗体CT149可中和部分group1和group2的A型流感病毒，而人源抗体FI6v3则是可中和大多数A型流感病毒的超级广谱抗体。这些抗体 的共同点是识别和结合HA茎部区的保守表位，可抑制流感病毒的HA在低pH下诱导的构象变化过程。这些抗体在小鼠或者雪貂的体内预防和治疗都能产生保护效果。