[发明专利]检测克伦特罗的化学发光酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种化学发光酶联免疫检测试剂盒，特别是检测动物组织、尿液、肝脏等样本中克伦罗残留量的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

克伦特罗(Clenbuterol)属于β-兴奋剂，俗称瘦肉精，别名：氨必妥、胺双氯喘通、克喘素，当克仑特罗以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”，能促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。近年来被非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，并且可以残留在动物体内。然而这种药物对人有严重的副作用，轻则导致心跳心律不正常，重则可引发心脏病，我国及许多国家已出台相关法规，禁止其作为饲料添加剂使用。

目前，主要采用高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和酶联免疫法(ELISA)等方法用于检测动物源性食品中克伦特罗的残留。高效液相色谱法、液相色谱、气相色谱法等仪器方法，精准度高、灵敏度高，但是大型仪器昂贵且需要专业检测技术人员，难以实现大样本现场筛查。酶联免疫方法检测价格低廉，快速，但是灵敏度不够，适用于微量物质的检测和鉴定，在痕量物质方面的检测，难以发挥优势。

化学发光免疫分析(Chemiluminescenceanalysis，CLlA)技术将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简便、不需要十分昂贵的仪器设备等特点。CLIA不需要外来光源，具有比荧光免疫分析更高的信噪比，比常规的酶联免疫吸附检测方法的抗背景干扰能力强，其灵敏度比ELISA高1至2个数量级，检测范围可达6个数量级，自动化程度高，提高了分析方法的精密度，CLIA已经成为一种先进的痕量或超痕量物质的检测技术。CLIA就在兽医学、医学、食品分析等方面，应用前景广阔。

本发明所要解决的技术问题在于提供一种克伦特罗检测试剂盒，采用该试剂盒进行克伦特罗的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有反应速度较快。

发明内容

本发明的另一个目的在于提供一种克伦特罗的测试方法，该方法特异性好、灵敏度高、操作简单的特点。

实现上述目的，本发明提供一种克伦特罗检测试剂盒，其包含的主要试剂有：

包被有抗克伦特罗单克隆抗体的聚苯乙烯化学发光板。

所述的克伦特罗标准品溶液6瓶，浓度分别为0ug/L、0.05ug/L、0.15ug/L、0.45ug/L、1.35ug/L、4.05ug/L。

酶标抗原浓缩液：是由克伦特罗与牛血清蛋白偶合制成的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到。

酶标抗原稀释液：0.01-0.02M磷酸盐缓冲液，pH7.0-8.0,0.5-1%的牛血清蛋白。

发光底物液。发光底物液分为A、B液。A液为化学发光底物-鲁米诺和发光增强剂-对甲苯酚溶液，B液为过氧化氢脲溶液。

复溶液。复溶液具体为2倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于样品前处理。

洗涤液。洗涤溶液具体为含有吐温-20（Tween-20）缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板。

本发明溶液的配制：

本发明试剂盒中涉及的酶标克伦特罗单克隆抗原溶液、化学发光溶液及洗涤溶液及其配方对本发明试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法如下：

1、酶标克伦特罗单克隆抗原溶液：用克伦特罗与偶联蛋白偶联制备的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到，将所得酶标克伦特罗抗原稀释成1:5000的工作浓度。

2、酶标抗原稀释液：0.01-0.02M磷酸盐缓冲液，pH7.0-8.0,0.5-1%的牛血清蛋白。

3、发光底物液：A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液，B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na₂HPO₄2.82g，0.75%的过氧化氢脲0.64mL的水溶液。

4、复溶工作液：pH值为7.5-7.8，含有2-4%酪蛋白，0.1-0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积比。