[发明专利]一种无需灭菌的植物组培培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种无需灭菌的石斛组培培养基的用途，其特征在于，所述的无需灭菌的石斛组培培养基，由按照如下组分组成：

NH₄NO₃ 1650mg/L、KH₂PO₄ 170mg/L、KNO₃ 1900mg/L、CaCl₂•2H₂O 440mg/L、MgSO₄•7H₂O370mg/L、KI 0.83mg/L、Na₂MoO₄•2H₂O 0.25mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、CuSO₄•5H₂O 0.025mg/L、MnSO₄•H₂O 16mg/L、CoCl₂•6H₂O 0.025mg/L、ZnSO₄•7H₂O 8.6mg/L、肌醇 100mg/L、盐酸硫胺素 0.1mg/L、烟酸 0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸吡哆醇 0.5mg/L、EDTA二钠37.3mg/L、FeSO₄•7H₂O 27.8mg/L、生长素IAA 0.1-0.5mg/L、细胞分裂素6-BA 0.1-0.5mg/L、玉米素0.1-0.5mg/L、蔗糖30g/L、碳粉10 g/L、香蕉水母液5-10g/L、异噻唑啉酮1-20mg/L、矿源煤基黄腐酸1-20mg/L、尼泊金酯钠1-20mg/L、柠檬酸1-20mg/L、琼脂3-5g/L，溶剂为蒸馏水，pH为5.5-6.5；

所述的香蕉水母液的制备方法是用成熟的水果香蕉剥皮煮水，按500-1000g已剥皮的香蕉加入1L水的比例进行加料，然后加热，待煮沸15-20分钟后，过滤，即可制得香蕉水母液；

制备方法包括如下步骤：

步骤（1），5种大量元素母液的制备：

分别将NH₄NO₃、KH₂PO₄、KNO₃、CaCl₂•2H₂O、MgSO₄•7H₂O加入蒸馏水中，混合均匀，得到浓度为165g/L的NH₄NO₃大量元素母液、浓度为17g/L的KH₂PO₄大量元素母液、浓度为190g/L的KNO₃大量元素母液、浓度为44g/L的CaCl₂•2H₂O大量元素母液和浓度为37g/L的MgSO₄•7H₂O大量元素母液，然后将这5种大量元素母液置于4℃下，备用；

步骤（2），微量元素母液的制备：

将KI、Na₂MoO₄•2H₂O、H₃BO₃、CuSO₄•5H₂O、MnSO₄•H₂O、CoCl₂•6H₂O和ZnSO₄•7H₂O一起加入到蒸馏水中，混合均匀，得到微量元素母液，然后置于4℃下，备用；微量元素母液中KI的浓度为0.083g/L，Na₂MoO₄•2H₂O的浓度为0.025g/L，H₃BO₃的浓度为0.62g/L，CuSO₄•5H₂O的浓度为0.0025g/L，MnSO₄•H₂O的浓度为1.69g/L，CoCl₂•6H₂O的浓度为0.0025g/L，ZnSO₄•7H₂O的浓度为0.86g/L；

步骤（3），有机母液的制备：

将肌醇、盐酸硫胺素、烟酸、甘氨酸和盐酸吡哆醇一起加入到蒸馏水中，混合均匀，得到有机母液，然后置于4℃下，备用；有机母液中肌醇的浓度为10g/L，盐酸硫胺素的浓度为0.01g/L，烟酸的浓度为0.05g/L，甘氨酸的浓度为0.2g/L，和盐酸吡哆醇的浓度为0.05g/L；

步骤（4），铁盐母液的制备：

将EDTA二钠和FeSO₄•7H₂O一起加入到蒸馏水中，混合均匀后，得到铁盐母液，然后置于4℃下棕色玻璃瓶，备用；所述的铁盐母液中EDTA二钠的浓度为3.73g/L，FeSO₄•7H₂O的浓度为2.78g/L；

步骤（5），其它物质母液的制备：

将生长素IAA先用体积分数为95%的酒精或1mol/L的NaOH溶解，然后再加入蒸馏水中，混合均匀，得到浓度为1mg/mL生长素IAA母液，置于阴凉避光处，备用；所用蒸馏水的体积为所用体积分数为95%的酒精或所用1mol/L的NaOH的体积的18-20倍；

将玉米素先用体积分数为95%的酒精或1mol/L的NaOH溶解，然后再加入蒸馏水中，混合均匀，得到浓度为1mg/mL玉米素母液，置于阴凉避光处，备用；所用蒸馏水的体积为所用体积分数为95%的酒精或所用1mol/L的NaOH的体积的18-20倍；

将细胞分裂素6-BA先用1mol/L的HCl溶解，然后再加入蒸馏水中，混合均匀，得到浓度为1mg/mL细胞分裂素6-BA母液，置于阴凉避光处，备用；所用蒸馏水的体积为所用1mol/L的HCl的体积的18-20倍；

将异噻唑啉酮、矿源煤基黄腐酸、尼泊金酯钠和柠檬酸分别用水溶解，配制成浓度为1mg/mL的异噻唑啉酮母液、浓度为1mg/mL的矿源煤基黄腐酸母液、浓度为1mg/mL的尼泊金酯钠母液、浓度为1mg/mL的柠檬酸母液；

步骤（6），培养基的配制：

取等体积的NH₄NO₃大量元素母液、KH₂PO₄大量元素母液、KNO₃大量元素母液、CaCl₂•2H₂O大量元素母液、MgSO₄•7H₂O大量元素母液、微量元素母液、有机母液和铁盐母液加入到蒸馏水中，然后向其中加入蔗糖，搅拌至完全溶解后，再向其中加入碳粉，搅拌至混合均匀，之后加入香蕉水母液，再加入琼脂并加热至沸腾，待10min后琼脂完全熔化，停止加热，接着加入上述配好的生长素IAA母液、玉米素母液、细胞分裂素6-BA母液、异噻唑啉酮母液、矿源煤基黄腐酸母液、尼泊金酯钠母液和柠檬酸母液，之后加入蒸馏水定容至体积是所用NH₄NO₃大量元素母液体积的100倍，最后调节pH至5.5-6.5，并用培养基分装机分装，待其自然降至室温，即得无需灭菌的石斛组培培养基；

其中，采用1mol/L的HCl和/或1mol/L的NaOH调节pH值；

所述的无需灭菌的石斛组培培养基用于石斛的继代和生根培养阶段。

2.根据权利要求1所述的无需灭菌的石斛组培培养基的用途，其特征在于，如果分装至无盖的无菌容器中，需要采用封口膜或牛皮纸封口，再用橡皮筋或绳子扎紧。