[发明专利]基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物的制备方法，尤其涉及基于平行分离模式制备色谱分离棘 豆中新化合物方法。

背景技术

棘豆属（OxytropisD.C.）植物属于豆科蝶形花亚科。该属植物为多年生草本，半 灌木或灌木，全世界约为300多种，而我国有棘豆属植物131种（药用植物为20余种），分别分 布于甘肃、青海、内蒙古、四川、西藏等地。棘豆属药用植物曾被收载于1977年版中国药典， 其在我国分布广泛，且民间常用于藏药和蒙药的复方之中。

藏药棘豆（OxytropisfalcateBunge）（藏药名为莪达夏）是豆科（Leguminosae） 棘豆属（OxytropisD.C.）多年生草本植物。生长在2700~4300m的河滩、沙地、山坡、草甸， 产于青藏高原。棘豆主要具有抗炎止疼、清热解毒、止血等功效，用于利便、除毒、清肿、止 血，可治疗麻风病、流感及扁桃体炎等多种病症。由于其突出的疗效，具有“草药之王”的美 誉。棘豆是藏医常用的三大抗炎药之一，藏医在临床上使用广泛，它是六味棘豆散、九味青 鹏散、奇正藏贴、奇正消痛贴膏的多种藏药复方或藏成药的主要药物，是一味非常具有研究 和开发价值的天然药物。

甘肃棘豆（OxytropiskansuensisBunge）是棘豆属有毒植物品种之一，同时具有 较强的药理活性，尤其在藏药中使用较多，具有解毒医疮，止血利尿，治疗各种内出血症。

多叶棘豆（Oxytropismyriophylla(Pall)DC.）在蒙药中使用较多，主要用于瘟 疫、炎症、丹毒、腮腺炎、麻疹、痛风、各种刺疼和出血等症。

目前，各国学者对棘豆属20多种药用植物分离得到了140多个化合物，其中多以黄 酮类、三萜类和生物碱类化学成分居多，，没有系统深入地研究棘豆中活性物质的作用机 制，仅对其进行了初步的药理活性研究。同时，也无法稳定获得纯度为98%以上的化学对照 品，不能满足棘豆新药创制及相关制剂的质量控制要求，从而制约了棘豆药材的药用开发 研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、重复性高、回收率高的基于平 行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物方法。

为解决上述问题，本发明所述的基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中新化合物 方法，包括以下步骤：

⑴制备棘豆提取物浸膏：

将棘豆用体积浓度为5~95%的乙醇或体积浓度为5~100%的甲醇进行微波提取，得到提 取液；所述提取液经减压浓缩后得到棘豆提取物浸膏；

⑵萃取：

将所述棘豆提取物浸膏用其质量1~10倍的去离子水溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯 进行萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和水部位；

⑶所述水部位注入大孔树脂层析柱中，依次用5~50倍柱体积且体积浓度为20%、40%、 60%、80%的乙醇进行洗脱，分别得到20%、40%、60%、80%的洗脱部位；

⑷将所述40%的乙醇部位干燥至恒重后，得到40%乙醇部位干燥粉末；

⑸将所述40%乙醇部位干燥粉末用其质量的1~30倍的去离子水溶解后，注入到具有平 行分离模式的制备色谱装置中，经过一级制备色谱柱分离并用20倍柱体积、体积浓度为40% ~60%甲醇冲洗样品、在线紫外检测，得到目标化合物组分，该目标化合物组分经捕集设备进 行富集浓缩，然后进入二级制备色谱柱，经二级制备色谱柱分离、体积浓度为40%~60%的甲 醇洗脱、在线紫外检测，即得符合化学对照品要求且纯度＞98%的新化合物kaempferol3- O-a-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[6-O-(3-hydroxy-3-methylglutaryl)-b-D- glucopyranoside。

所述步骤⑴中棘豆为镰形棘豆、甘肃棘豆、多叶棘豆中一种。

所述步骤⑴中微波提取的条件是指料液比为1g：5mL~30mL，提取温度为60~95 ℃，提取次数1~4次，每次1~4h，微波功率为1~100KW。

所述步骤⑴中减压浓缩的条件是指压力为0.02~0.07MPa。

所述步骤⑷中干燥的条件是指温度为50~80℃。

所述步骤⑸中一级制备色谱柱的分离条件是指流速为20~60mL/min，检测波长为 200~400nm。