[发明专利]从猪皮中提取透明质酸的方法

权利要求书

1.从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）粗提；（2）除蛋白，沉淀；（3）酶解；（4）络合、解离、沉淀。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）粗提：将猪皮脱水后粉碎，加水浸泡提取，过滤，得粗提液；

（2）除蛋白，沉淀：粗提液与氯仿混合搅拌，分出水相，水相加95%乙醇，收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥，得粗品透明质酸；

（3）酶解：粗品透明质酸溶于0.1mol/L氯化钠，调pH，加入氯仿搅拌，分出水相，水相调pH，加蛋白水解酶，酶解；

（4）络合、解离、沉淀：酶解液用氯仿除杂蛋白，然后加入浓度为1%的氯化十六烷基吡啶（CPC），放置后，收集沉淀，解离，离心，取出清液，清液加入95%乙醇，收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥，得精品透明质酸。

3.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，所用原料为解冻后的冷冻猪皮。

4.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，“加水浸泡提取”具体为“加水，并用胶体磨研磨脱水粉碎后的猪皮，按每1kg猪皮加水6～8L，加氯化钠80～100g，搅拌加热至80～90℃，保温10～20min，冷却至40～50℃”，“过滤”具体为“用滤布加硅藻土加压过滤”。

5.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，粗提液或酶解液与氯仿混合的体积比均为1:（0.5～1.5）。

6.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，粗提液与95%乙醇的体积比为1：（1.5～3.0）。

7.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为“粗品透明质酸溶于0.1mol/L氯化钠，溶解质量浓度为0.5%～1.5%，用1mol/L盐酸调pH值至4.0～5.0，按体积比为1:（0.5～1.5）比例加入氯仿搅拌，分出水相，水相用稀氢氧化钠调pH值至7.0～8.0，加蛋白水解酶，于30～40℃，酶解20～30h”。

8.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，所用蛋白水解酶为：胰酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶等。

9.根据权利要求2所述的从猪皮中提取透明质酸的方法，其特征在于，所述步骤（4）中，酶解液与浓度为1%的氯化十六烷基吡啶（CPC）的体积比为1:（0.5～1.5），清液与95%乙醇的体积比为1:（2～4）。