[发明专利]EHD2抗体在制备卵巢癌免疫组化检测试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种EHD2抗体在制备卵巢癌免疫组化检测试剂中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类生命和健康的常见病和多发病，是导致残疾和早死的主要疾病之一，在35～59岁年龄组中，恶性肿瘤居死因第一位。资料显示，我国恶性肿瘤年发病例数为200万，死亡约150万，并以3％的速度递增且呈年轻化趋势，居各类疾病中死亡率之最。

卵巢癌是卵巢肿瘤的一种恶性肿瘤，是指生长在卵巢上的恶性肿瘤，其中90％～95％为卵巢原发性的癌，另外5％～10％为其它部位原发的癌转移到卵巢。卵巢癌的发病率低于宫颈癌和子宫内膜癌居妇科恶性肿瘤的第三位，但死亡率却超过宫颈癌及子宫内膜癌之和，高居妇科癌症首位，是严重威胁妇女健康的最大疾患。尽管化疗在恶性肿瘤的治疗中占有非常重要的地位，但是在临床实践中，结果往往不尽如人意。目前，包括卵巢癌在内的肿瘤异质性问题得到广泛重视，即使在临床表现上或传统病理分型上类同的肿瘤，其发病的分子根源也不尽相同，这就要求从分子病理水平更深入地探究肿瘤，提高诊疗的精准度。目前，利用免疫组织化学方法对关键肿瘤相关蛋白进行组织学检测是关系到肿瘤精准诊疗的重要环节。

免疫组织化学技术应用免疫学抗原抗体反应基本原理，通过抗体对体内蛋白质分子抗原的特异性识别，以及化学标记(荧光素、酶、金属离子、同位素等)的第二抗体的显色等作用来检测组织细胞内目标抗原(多肽和蛋白质)的表达量及其亚细胞定位。近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的成功研发，更主要的是对肿瘤分子机制认识的不断深入，免疫组化在肿瘤的分子诊断与鉴别中的应用价值受到了普遍的认可。

本申请前期研究发现EHD2蛋白的表达水平与卵巢癌的恶性程度相关，自主研发的EHD2特异抗体可用于卵巢癌的免疫组化检测。EHD2(Epsinhomology(EH)-domain-containingprotein2)是EHD蛋白的一种，是一类新型膜转运调控蛋白，含有高度保守的EH结构域。参与受体内吞等胞膜转运的多步调控，是整个胞膜转运机制的必不可少的重要环节，在多种细胞中起分子与物质运输及信号传导等关键作用，它的失调将导致细胞信号应答失当及细胞功能紊乱，并可能进而引发疾病。因此对EHD2进行免疫组化检测将更客观准确地反映肿瘤的异化本质和患者个体的临床特性。目前，由EHD2特异抗体制备的免疫组化试剂未见报道，EHD2抗体在制备卵巢癌免疫组化检测试剂中的应用也没有先例。

为解决上述问题，本发明公开了一种EHD2特异抗体在制备卵巢癌免疫组化检测试剂中的应用。

虽然现有的商业化EHD2抗体有十余种，由主流抗体试剂公司SantaCruz和Abcam等提供，但是均属于基础研究用试剂，没有依据表明这些抗体可以和我们的抗体一样具有合格的特异性并可用于卵巢癌免疫组化检测，特别是目前尚没有任何其它EHD2抗体经过大量组织标本的免疫组化验证并显示出可以通过对EHD2的组织细胞表达水平进行检测来达到对卵巢癌恶性度及患者生存情况进行预后预判的目的。与本专利申请抗体相比它们有如下缺陷：

1、根据本领域公知常识,能够用于免疫组化(IHC)的抗体会在其使用说明中作出明确标识和注明，按这些抗体的说明所示，大多数都不能用于免疫组化(IHC)检测。虽然个别抗体标明可用于免疫组化(IHC)，但仔细研究发现并非如此。一个是南京森贝伽公司代理的EHD2抗体，但是注明了只能检测膜定位。另一个是Proteintech公司的货号为11440-1-AP的抗体，然而此抗体的特异性存在问题：首先免疫印迹检测得到的主要信号位置明显小于60kD，而70kD的正常位置信号却很弱，说明虽然可以检测到EHD2，但更多检测到的是其它未知分子；其次从公司发表的该抗体对卵巢癌组织的免疫组化图中可见染色信号为明显的基质成分的非特异性着色。

2、这些抗体均为研究用试剂，没有经过大样本临床病例试验或验证，没有关键的对EHD2的细胞定位检测能力。

3、均没有经过严格的免疫印迹特异性验证，特别是与EHD2蛋白的同源蛋白EHD1、EHD3、EHD4的交叉反应的免疫印迹实验验证，而这些验证对EHD2的免疫组化检测方法来说尤其重要，因为它们之间具有很高的同源性(>70％)。中国文献“EHD2下调促进乳腺上皮细胞转化的研究”(田刚等，现代医学检验杂志，2012年第27卷第1期，49-51)公开了一种由其自制的EHD2抗体，这一抗体是采用我们的没有经过抗原纯化的抗体，可以用于免疫印迹检测，但不能满足免疫组化检测的高度特异性要求。